[理学]东南大学出版社 仪器分析第二版课件 第八章 平面色谱法.pptVIP

§1 概述 一. 色谱法 (层析法) 二、平面色谱法参数 （一）定性参数-保留值(组分与固定相作用力大小) 1. 比移值Rf(retardation factor；Rf) 溶质移动的距离与流动相移动距离之比 图示 Rf范围： 0 Rf 1 Rf = 0.2~0.8（最佳） next L0 back 2. 相对比移值Rr 参考物与被测组分在完全相同条件下展开,可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性； 参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分; 相对比移值Rs与组分、参考物性质及色谱条件有关，范围可以大于或小于1 （二）相平衡参数 1. 分配系数K和容量因子k 3. 薄层板一定，Rf只与组分性质有关，对于极性组分， 展开剂极性↑大，Rf↑大 展开剂极性↓小，Rf↓小 （三）板效参数 1、理论塔板数—色谱分离性能指标 n=16(L/W)2 L:原点到斑点中心的距离 W：组分斑点的纵向宽度 2、塔板高度 H=L0/n L0：原点到展开剂前沿的距离 n越大，H越小。 （四）分离参数 1、分离度(resolution; R) ：两相邻斑点中心的距离与两斑点平均宽度的比值 L1 、L2 :分别为原点至两半斑点中心的距离， W1、W2斑点的宽度。 2.分离数(separation number; SN) 相邻斑点分离度为1.177时，在Rf=0(原点)到Rf=1(溶剂前沿)之间能容纳的色谱斑点数。 SN=L0/(b0+b1)-1 b0：Rf=0组分的半峰宽；b1： Rf=1组分的半峰宽 1．定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上， 形成薄层而进行色谱分离和分析的方法 2．操作过程： 铺板 →活化 →点样 → 展开 →定位(定性)/洗脱(定量) 3．分离机制：吸附* 、分配*、离子交换、空间排阻 4．特点；分离能力强、灵敏度高、展开时间较短、显色方便。 5．应用：药物杂质检查、纯度测定、定量 next 一、主要类型 （一）吸附薄层色谱 固定相为吸附剂的薄层色谱。利用吸附剂对不同组分的吸附能力差异而实现分离。经过吸附、解吸、再吸附、再解吸……最后混合物得到分离。K大，Rf值小，移动慢；K小，Rf大，移动快。 （二）分配薄层色谱 固定相为液体，吸留在载体上的薄层色谱。利用被分离组分在固定相与流动相中的分配系数不同而被分离。常用的是反相薄层色谱法，固定相是烷基化学键合相，展开剂是水及与水相溶的有机溶剂。 二、吸附薄层色谱的吸附剂与展开剂 (一）吸附剂 硅胶：氢键吸附，适合与中性和酸性物质。硅胶H、硅胶G、硅胶F254 氧化铝：可分为中性（pH7.5)、碱性（pH9.0）和酸性（pH4.0） （二）展开剂 石油醚环己烷二硫化碳四氯化碳三氯乙烷苯甲苯二氯甲烷乙醚氯仿乙酸乙酯正丁醇丙酮乙醇甲醇吡啶酸水 (三) 吸附剂与展开剂的选择 展开剂的选择：根据被测组分、吸附剂和展开剂本身的极性 三、操作方法 制板-点样-展开-显色 定性分析——窄条 定量分析——10×20cm 展开：层析缸，预饱和，防止边缘效应浸入展开剂深度0.5?1.0cm，展开至整板3/4距离,标记。 四、定性和定量分析 五、高效薄层色谱法 高效薄层色谱法（high performance thin layer chromatography；HPTLC)所用的吸附剂颗粒很小(5μm或10μm)，用喷雾法制成高效薄层板。常用的有硅胶、氧化铝、纤维素和化学键合相预制薄层板。 六、薄层扫描法 薄层扫描法是用一定强度光束照射薄层上的斑点，用仪器测量照射前后光束强度的变化，从而求得物质含量的方法。 检测方法 吸收