CN107400660-CN201710883038-一种高效激活和扩增NKT细胞的新方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107400660 A (43)申请公布日 2017.11.28 (21)申请号 201710883038.1 (22)申请日 2017.09.26 (71)申请人 上海莱馥医疗科技有限公司 地址 201114 上海市闵行区新骏环路138号 4幢5层501室 (72)发明人 李新峰　周雁冰　汪佳莹　李文荣　 (74)专利代理机构 上海信好专利代理事务所 (普通合伙) 31249 代理人 周荣芳 (51)Int.Cl. C12N 5/0783(2010.01) 权利要求书1页 说明书5页 附图1页 (54)发明名称 一种高效激活和扩增NKT细胞的新方法 (57)摘要 本发明公开了一种高效激活和扩增NKT细胞 的新方法，包括以下步骤：步骤1：从外周血中分 离出PBMC细胞；步骤2：将分离出的PBMC细胞经培 养基重悬后，转移至经抗人CD3抗体和重组人纤 连蛋白包被过的培养容器中，并向培养基中加入 IFN-γ后进行培养；步骤3：向培养基中继续加入 维生素C、人血清白蛋白、IL-2和OK432后继续培 养，得到NKT细胞。本发明能显著的提高NKT细胞 的纯度和与产量；且本发明提供的NKT培养方法 操作简单，所耗费的成本也比较低。在培养NKT细 胞的起始阶段使用CD3抗体和纤连蛋白，这能够 很大程度的提高NKT的诱导效率。在NKT细胞的培 A 养基里面加入IFN-γ和OK432，可以显著的增加 0 NKT细胞的杀伤能力，而且OK432能明显的促进 6 6 0 NKT细胞的增殖能力。 0 4 7 0 1 N C CN 107400660 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种高效激活和扩增NKT细胞的新方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤1：从外周血中分离出PBMC细胞； 步骤2：将分离出的PBMC细胞经培养基重悬后，转移至经抗人CD3抗体和重组人纤连蛋 白包被过的培养容器中，并向培养基中加入IFN-γ后进行培养； 步骤3：向培养基中继续加入维生素C、人血清白蛋白、IL-2和OK432后继续培养，得到 NKT细胞。 2.如权利要求1所述的高效激活和扩增NKT细胞的新方法，其特征在于，在步骤2中，所 述抗人CD3抗体和重组人纤连蛋白由培养基配制后对培养容器进行包被。 3.如权利要求2所述的高效激活和扩增NKT细胞的新方法，其特征在于，所述抗人CD3抗 体的浓度为1-40μg/ml；所述重组人纤连蛋白的浓度为1-10μg/ml。 4.如权利要求1所述的高效激活和扩增NKT细胞的新方法，其特征在于，在步骤2中，所 述包被的时间为8-24h，温度条件为0-10℃。 5.如权利要求1所述的高效激活和扩增NKT细胞的新方法，其特征在于，在步骤2中，所 述IFN-γ的终浓度为1-1000U/ml。 6.如权利要求1所述的高效激活和扩增NKT细胞的新方法，其特征在于，在步骤3中，所 述维生素C的终浓度为1-10μg/ml；所述人血清白蛋白的终浓度为0.5-10mg/ml；所述IL-2的 终浓度为1-1000U/ml；所述OK432的终浓度为1-10μg/ml。 7.如权利要求1所述的高效激活和扩增NKT细胞的新方法，其特征在于，在步骤3中，根 据细胞的生长情况，每隔1-3天补加培养基、维生素C、人血清白蛋白和IL-2。 8.如权利要求7所述的高效激活和扩增NKT细胞的新方法，其特征在于，每次补加后，将 细胞转移至没有被抗人CD3抗体和重组人纤连蛋白包被