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CN107389412-CN201710768140-一种虾蟹类富水性组织的石蜡切片制作方法

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107389412 A (43)申请公布日 2017.11.24 (21)申请号 201710768140.7 (22)申请日 2017.08.31 (71)申请人 山东农业大学 地址 271018 山东省泰安市岱宗大街61号 (72)发明人 王慧 朱鹏 孙姚佳代  (74)专利代理机构 济南誉丰专利代理事务所 (普通合伙企业) 37240 代理人 高强 (51)Int.Cl. G01N 1/28(2006.01) 权利要求书2页 说明书6页 附图4页 (54)发明名称 一种虾蟹类富水性组织的石蜡切片制作方 法 (57)摘要 本发明涉及一种虾蟹类富水性组织的石蜡 切片制作方法;常规的石蜡组织切片方法指标对 于组织形态难固定、质地柔软、富水性的虾蟹类 组织器官缺乏组织区分度,易造成组织破碎、重 叠、折曲,严重影响组织的显微观察效果,难以获 得理想清晰的组织结构。本发明通过对样品的负 压、固定和包埋处理进而定型组织、延展组织避 免褶皱重叠和因富水性组织的弹性而存在误差。 本发明操作简便、可行性强、周期短,对于组织形 态难固定、质地柔软、富水性的虾蟹类组织器官 具有很好的组织区分度,可以实现完整的组织形 A 态的石蜡切片观察,能满足研究人员对切片组织 2 观察的全部要求。 1 4 9 8 3 7 0 1 N C CN 107389412 A 权 利 要 求 书 1/2页 1.一种虾蟹类组织的石蜡切片方法,其特征在于步骤如下: 1)将样品组织放于组织固定液中,立即负压固定,负压至样品组织块膨胀饱满、不再产 生气泡;再立即加入到盛有相同浓度的组织固定液的适宜体积的离心管中,离心管中组织 固定液的量与样品组织体积之比为20:1;避免组织块贴于容器壁上,室温恒温固定4-6h;所 述负压的压力值为-1.25kpa;负压容器总容积:容器中组织固定液总体积:样品组织体积= 6:3:1; 所述组织固定液为溶质质量分数2.5%的多聚甲醛溶液;多聚甲醛溶液具体制备方法 为:取多聚甲醛50g,1×PBS缓冲溶液900ml,加水至1000ml,混合后60℃下水浴24h,若还有 未溶解的多聚甲醛,滴加1-2滴1当量的NaOH溶液,调节PH为6.8-7.2,4℃下保存; 0.01M所述1×PBS缓冲溶液的组份为:Na HPO  8mM,NaCl  136mM,KH PO  2mM,KCl  2 4 2 4 2.6mM,PH=7.2-7.4; 所述1当量的NaOH溶液为:称取NaOH固体粉末10g,用250mL的容量瓶配置成250mL、 1mol/L的NaOH溶液。 2)将步骤1)固定后的样品组织放入包埋盒中,用流动清水不间断流动冲洗包埋盒24h; 洗除样品组织中残留的固定液; 3)对冲洗完毕的样品组织在常温下,依次用梯度浓度为30%、40%、50%、60%、70%、 80%、90%、100%的乙醇溶液脱水处理;浓度为30%的乙醇溶液脱水处理时间分别为4h- 5h;浓度为40%、50%、60%、70%的乙醇溶液脱水处理时间分别为40min-1h,浓度为80%、 90%、100%的乙醇脱水处理时间分别为15min-35min;当乙醇溶液浓度≤70%时,所述乙醇 溶液与样品组织的体积比为50:1;当乙醇溶液浓度浓度≥70%时,所述乙醇溶液与样品组 织的体积比为35:1;脱水处理完成后将装有样品组织的包埋

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