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CN107389412-CN201710768140-一种虾蟹类富水性组织的石蜡切片制作方法
(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 107389412 A
(43)申请公布日
2017.11.24
(21)申请号 201710768140.7
(22)申请日 2017.08.31
(71)申请人 山东农业大学
地址 271018 山东省泰安市岱宗大街61号
(72)发明人 王慧 朱鹏 孙姚佳代
(74)专利代理机构 济南誉丰专利代理事务所
(普通合伙企业) 37240
代理人 高强
(51)Int.Cl.
G01N 1/28(2006.01)
权利要求书2页 说明书6页 附图4页
(54)发明名称
一种虾蟹类富水性组织的石蜡切片制作方
法
(57)摘要
本发明涉及一种虾蟹类富水性组织的石蜡
切片制作方法;常规的石蜡组织切片方法指标对
于组织形态难固定、质地柔软、富水性的虾蟹类
组织器官缺乏组织区分度,易造成组织破碎、重
叠、折曲,严重影响组织的显微观察效果,难以获
得理想清晰的组织结构。本发明通过对样品的负
压、固定和包埋处理进而定型组织、延展组织避
免褶皱重叠和因富水性组织的弹性而存在误差。
本发明操作简便、可行性强、周期短,对于组织形
态难固定、质地柔软、富水性的虾蟹类组织器官
具有很好的组织区分度,可以实现完整的组织形
A 态的石蜡切片观察,能满足研究人员对切片组织
2 观察的全部要求。
1
4
9
8
3
7
0
1
N
C
CN 107389412 A 权 利 要 求 书 1/2页
1.一种虾蟹类组织的石蜡切片方法,其特征在于步骤如下:
1)将样品组织放于组织固定液中,立即负压固定,负压至样品组织块膨胀饱满、不再产
生气泡;再立即加入到盛有相同浓度的组织固定液的适宜体积的离心管中,离心管中组织
固定液的量与样品组织体积之比为20:1;避免组织块贴于容器壁上,室温恒温固定4-6h;所
述负压的压力值为-1.25kpa;负压容器总容积:容器中组织固定液总体积:样品组织体积=
6:3:1;
所述组织固定液为溶质质量分数2.5%的多聚甲醛溶液;多聚甲醛溶液具体制备方法
为:取多聚甲醛50g,1×PBS缓冲溶液900ml,加水至1000ml,混合后60℃下水浴24h,若还有
未溶解的多聚甲醛,滴加1-2滴1当量的NaOH溶液,调节PH为6.8-7.2,4℃下保存;
0.01M所述1×PBS缓冲溶液的组份为:Na HPO 8mM,NaCl 136mM,KH PO 2mM,KCl
2 4 2 4
2.6mM,PH=7.2-7.4;
所述1当量的NaOH溶液为:称取NaOH固体粉末10g,用250mL的容量瓶配置成250mL、
1mol/L的NaOH溶液。
2)将步骤1)固定后的样品组织放入包埋盒中,用流动清水不间断流动冲洗包埋盒24h;
洗除样品组织中残留的固定液;
3)对冲洗完毕的样品组织在常温下,依次用梯度浓度为30%、40%、50%、60%、70%、
80%、90%、100%的乙醇溶液脱水处理;浓度为30%的乙醇溶液脱水处理时间分别为4h-
5h;浓度为40%、50%、60%、70%的乙醇溶液脱水处理时间分别为40min-1h,浓度为80%、
90%、100%的乙醇脱水处理时间分别为15min-35min;当乙醇溶液浓度≤70%时,所述乙醇
溶液与样品组织的体积比为50:1;当乙醇溶液浓度浓度≥70%时,所述乙醇溶液与样品组
织的体积比为35:1;脱水处理完成后将装有样品组织的包埋
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