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2018-03-13 发布于天津
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CN107312749-CN201710692030-一种卵母细胞激活的物理方法及其受精潜能的评价指标

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107312749 A (43)申请公布日 2017.11.03 (21)申请号 201710692030.7 G01N 21/64(2006.01) G01N 21/63(2006.01) (22)申请日 2017.08.14 (71)申请人北京大学人民医院地址 100044 北京市西城区西直门南大街 11号申请人北京大学 (72)发明人鹿群　刘佳卉　梁蓉　国晋菘　王建六　王凯乐　董飞宏　张珏　方竞　 (74)专利代理机构北京万象新悦知识产权代理事务所(普通合伙) 11360 代理人苏爱华 (51)Int.Cl. C12N 5/075(2010.01) C12N 13/00(2006.01) 权利要求书1页说明书6页附图2页 (54)发明名称一种卵母细胞激活的物理方法及其受精潜能的评价指标 (57)摘要本发明涉及一种卵母细胞激活的物理方法及其受精潜能的评价指标，采用电脉冲序列激活卵母细胞，用共聚焦显微镜下检测到的胞浆内钙离子浓度变化所形成的钙振荡特征作为卵母细胞受精潜能的评价指标。 A 9 4 7 2 1 3 7 0 1 N C CN 107312749 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种卵母细胞激活的物理方法及其受精潜能评价指标，其特征在于：使用电脉冲序列刺激卵母细胞，用卵母细胞胞浆内钙离子浓度变化所形成钙振荡的特征作为评价卵母细胞受精潜能的指标。 2.根据权利要求1所述的卵母细胞激活的物理方法，其特征在于：将卵母细胞及卵母细胞培养液HTF置于电极杯后施加电脉冲序列进行处理，将处理后的卵母细胞经培养液洗涤 2-4次，移入36-37℃、5-10％CO 的培养箱中连续培养7-8天。 2 3.根据权利要求1和2所述的电脉冲序列，其特征在于：先用电场强度为35kV/cm-50kV/ cm，脉冲频率为0.5Hz-1.5Hz，脉冲宽度为30ns-300ns的脉冲作用3-10秒，再用电场强度为 5kV/cm-35kV/cm，脉冲频率为0.5Hz-1.5Hz，脉冲宽度为10ns-30ns的脉冲作用3-5秒。 4.根据权利要求1所述的受精潜能的评价指标，其特征在于：将经过前处理激活后的卵母细胞用钙离子探针染色，置于共聚焦显微镜下，检测胞浆内钙离子浓度随时间的变化。 5.根据权利要求1所述的受精潜能的评价指标，其特征在于：将钙离子浓度峰值30％处上升到峰值所需要的时间与从峰值下降到峰值30％处所需时间之比作为卵母细胞受精潜能的指标；钙振荡衰减因子如下，用于反映有效囊胚率：其中：n为超过阈值的钙峰个数，阈值为最大钙离子浓度的70％，T为共聚焦显微镜的扫描时间；定义钙峰个数大于等于10时，有效囊胚率为100％。 2 2 CN 107312749 A 说　明　书 1/6页一种卵母细胞激活的物理方