CN107102154-CN201710385170-一种检测细胞应激反应中蛋白表达的微阵列芯片、制备方法、试剂盒及检测方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107102154 A (43)申请公布日 2017.08.29 (21)申请号 201710385170.X (22)申请日 2017.05.26 (71)申请人 广东南芯医疗科技有限公司 地址 510663 广东省广州市萝岗区科学城 神舟路885号 (72)发明人 林金飞　陈涛　张召　陈林　 (74)专利代理机构 广州嘉权专利商标事务所有 限公司 44205 代理人 胡辉 (51)Int.Cl. G01N 33/68(2006.01) G01N 35/00(2006.01) 权利要求书1页 说明书6页 附图1页 (54)发明名称 一种检测细胞应激反应中蛋白表达的微阵 列芯片、制备方法、试剂盒及检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种检测细胞应激反应中蛋 白表达的微阵列芯片、制备方法、试剂盒及检测 方法。本发明的微阵列芯片的组成上，选用了7类 应激反应标志物，可以明确不同刺激条件下细胞 应激反应应对的内部细胞蛋白表达的变化，实现 快速筛选与评价；本发明选用醛基化修饰的玻片 作为固体载体，使特异性抗体结合更稳定，活性 更高；能够有效排除光谱芯片测试的假阳性和假 阴性，交叉反应测试显示芯片的指标测试灵敏度 高、特异性好；本发明的微阵列芯片制备方法简 便，检测快速，整个流程只需2d完成；灵敏度高； A 特异性好，并且制作成本较低，有广阔的产业化 4 前景。 5 1 2 0 1 7 0 1 N C CN 107102154 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种检测细胞应激反应中蛋白表达的微阵列芯片，其包括固体载体及列阵式固定在 固体载体上的应激反应标志物的独立地特异性抗体；所述的应激反应标志物为下述各类标 志蛋白的一类或多类：细胞增殖标志蛋白、细胞凋亡标志蛋白、细胞自噬标志蛋白、细胞迁 移标志蛋白、蛋白质翻译标志蛋白、细胞干性标志蛋白、细胞应激标志蛋白。 2.根据权利要求1所述的微阵列芯片，其特征在于：所述的应激反应标志物为下述各类 标志蛋白的一类或多类，各类标志蛋白含有多个独立地标志蛋白，其中： 细胞增殖标志蛋白为PCNA、Ki67、CyclinD1； 细胞凋亡标志蛋白为PRAP、Caspase3、Caspase9、Caspase8、Caspase12、Bcl-2、Bad； 细胞自噬标志蛋白为LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、p62、Atg3、Atg5、Atg7、Atg12； 细胞迁移标志蛋白为FAK、cofilin、profilin、CDC42、α-Tubulin； 蛋白质翻译标志蛋白为eIF2B、eIF4EBP1、p70S6K、mTOR、eIF4E、S6RP； 细胞干性标志蛋白为Oct3/4、SSEA-3/4/1、SOX2、Nanog、CD34、ABCG2、STRO-1、Nestin、 PSA-NCAM、Sca-1、CD44、CD166、CD133； 细胞应激标志蛋白为HIF1、HIF2、P53、ATF4、HSP70、HSP90、ROS、Nrf2、ATF6。 3.根据权利要求1所述的微阵列芯片，其特征在于：固体载体为醛基化修饰的玻片。 4.根据权利要求1所述的微阵列芯片，其特征在于：微阵列芯片的固体载体上还列阵式 固定有阳性对照蛋白的特异性抗体和/或阴性对照蛋白的特异性抗体。 5.一种制备如权利要求1～4任一项所述的检测细胞应激反应中蛋白表达的微阵列芯 片的方法，包括如下步骤： 按点间距离为300～400μm