CN107091833-CN201710301031-一种快速评价石油污染土壤生态毒性的方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107091833 A (43)申请公布日 2017.08.25 (21)申请号 201710301031.4 (22)申请日 2017.05.02 (71)申请人 北京大学 地址 100080 北京市海淀区颐和园路5号 (72)发明人 黄艺　陈惠苑　汪杰　曹晓峰　 许天平　黄梵　 (74)专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 代理人 关畅　吴爱琴 (51)Int.Cl. G01N 21/76(2006.01) 权利要求书1页 说明书10页 附图4页 (54)发明名称 一种快速评价石油污染土壤生态毒性的方 法 (57)摘要 本发明提供了一种快速评价石油污染土壤 生态毒性的方法，包括下述步骤：1)以鼠李糖脂 溶液为提取剂对待测石油污染土壤中的石油污 染物进行提取，得到待测石油污染物提取液；2) 将所述待测石油污染物提取液与发光细菌混合 反应，同时以NaCl溶液为对照，将NaCl溶液与发 光细菌混合反应相同的时间，分别记录试样和对 照的即时发光量，计算样品的相对发光率(％)； 3)根据所述样品的相对发光率，评价土壤样品生 态毒性等级。本发明选择发光细菌作为土壤石油 污染的感应菌，通过选择能稳定、灵敏、快速地反 A 映环境中石油污染浓度变化的菌种，以其光强作 3 为检测指标，通过构建光强－石油污染浓度，以 3 8 1 及石油污染浓度－毒性关系模型，建立石油污染 9 0 7 土壤生态毒性快速检测技术和评价标准。 0 1 N C CN 107091833 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种快速评价石油污染土壤生物毒性的方法，包括下述步骤： 1)以鼠李糖脂溶液为提取剂对待测石油污染土壤中的石油污染物进行提取，得到待测 石油污染物提取液； 2)将所述待测石油污染物提取液与发光细菌混合反应，同时以NaCl溶液为对照，将 NaCl溶液与发光细菌混合反应相同的时间，分别记录试样和对照的即时发光量，根据下述 公式计算样品的相对发光率(％)； 3)根据所述样品的相对发光率，判断土壤样品生态毒性。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)中，所述鼠李糖脂溶液的浓度为1- 2g/100ml； 所述鼠李糖脂溶液与待测石油污染土壤的配比为：9-11ml：1g。 3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤2)中，所述发光细菌为费氏弧菌； 所述待测石油污染物提取液与发光细菌的配比为：1ml：0.8-1.2ml，其中，发光细菌每 毫升菌液不低于1.6万个细胞或2万个细胞； 所述NaCl溶液为浓度为2g/100ml的氯化钠溶液； 所述NaCl溶液与发光细菌的配比为：1ml：0.8-1.2ml； 所述反应的时间为14-16min。 4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述发光细菌为发光细菌冻干粉，优选为 发光细菌冻干粉复苏溶液； 所述发光细菌冻干粉复苏溶液通过下述步骤进行制备：将冷的氯化钠溶液注入发光细 菌冻干粉中，充分混合后，静置复苏发光； 其中，所述氯化钠溶液的浓度为2g/100ml； 所述氯化钠溶液与发光细菌冻干粉的配比为2ml：0.5g，其中，发光细菌冻干粉中休眠 细胞密度不低于每克800万个细胞； 所述静置的时间为10min。 5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于：步骤3)中，当相对发光率小于 55％时，该样品生态毒性为剧毒；相对