CN106950374-CN201710227929-Glypican1蛋白在胰腺癌诊断中的应用、阳性外泌体浓度的检测方法及其用途.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 106950374 A (43)申请公布日 2017.07.14 (21)申请号 201710227929.1 (22)申请日 2017.04.10 (71)申请人 南通大学附属医院 地址 226019 江苏省南通市西寺路20号 (72)发明人 肖明兵　朱净　郁莉莉　倪润洲　 江枫　陆翠华　倪温慨　鲍柏军　 吴红培　 (74)专利代理机构 北京科亿知识产权代理事务 所(普通合伙) 11350 代理人 汤东凤 (51)Int.Cl. G01N 33/574(2006.01) G01N 33/532(2006.01) G01N 21/65(2006.01) 权利要求书2页 说明书5页 附图1页 (54)发明名称 Glypican-1蛋白在胰腺癌诊断中的应用、阳 性外泌体浓度的检测方法及其用途 (57)摘要 本发明公开了Glypican-1蛋白在胰腺癌诊 断中的应用、Glypican-1阳性外泌体浓度的检测 方法及其用途，纳米等离子体增强散射（nPES）检 测方法可用于量化血清中的外泌体，而省略提取 外泌体的过程，利用外泌体上特征性的抗原作为 靶点，与携带有金纳米颗粒的相应抗体形成抗原 抗体复合物，从而得到外泌体，利用金纳米颗粒 辐射光的原理可反映外泌体的量。Glypican-1是 胰腺癌来源的外泌体的生物学标志，即使是胰腺 癌早期，血浆中Glypican-1蛋白阳性外泌体的含 量就显示出一定的特异性，故该指标可用于诊断 A 胰腺癌，并且其水平与胰腺肿瘤患者的分期和进 4 展关系密切。实验证明，用nPES检测方法测定血 7 3 0 清中含Glypican-1的外泌体的量更为简洁、准 5 9 6 确，且其诊断胰腺癌的敏感性和特异性均优于 0 1 CA19-9。 N C CN 106950374 A 权　利　要　求　书 1/2页 1.一种Glypican-1蛋白的用途，其特征在于，用于制备诊断胰腺癌的产品。 2.根据权利要求1所述的Glypican-1蛋白的用途，其特征在于，所述产品为芯片、检测 试剂或检测试剂盒。 3.根据权利要求2所述的Glypican-1蛋白的用途，其特征在于，所述芯片包括蛋白芯 片，所述检测试剂盒包括蛋白免疫检测试剂盒。 4.一种Glypican-1阳性外泌体浓度的检测方法，其特征在于，为纳米等离子体增强散 射方法。 5.根据权利要求4所述的Glypican-1阳性外泌体浓度的检测方法，其特征在于，所述纳 米等离子体增强散射方法所用检测试剂包括以下组成： （Ⅰ）氨基功能化的玻璃载片、甲醇、氮气流、50孔聚二甲基硅氧烷膜； （Ⅱ）磷酸盐缓冲洗涤液，pH值为7.4，其成分为：140mM NaCl，2.7mM KCl，10mM Na HPO ， 2 4 1.8mM KH PO ； 2 4 （Ⅲ）封闭液为含5%牛血清蛋白的PBS，pH值为7.4，其成分为：PBS，5%BSA； （Ⅳ）羧基功能化的金纳米颗粒：50nm金纳米球、25×60nm金纳米棒； （Ⅴ）MES溶液，pH值为4.7，其成分为：2-（N-吗啉代）乙磺酸，用纯水配制； （Ⅵ）浓度为5mM的EDC/PBS溶液、EDC / NHS溶液， EDC系羟基胶乳微球偶联抗