高效液相色谱分析混合样品中苯和甲苯的含量.doc

【实验题目】 高效液相色谱分析混合样品中苯和甲苯的含量 【实验目的】 1、掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法 2、了解高效液相色谱的构造、原理及操作技术 【实验原理】??????????? 高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动是，经过反复多次的吸附－解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。 【实验仪器和试剂】 （1）仪器 ? ?LC-20AT液相色谱仪；微量注射器 10μL、1μL各1支 （2）试剂 苯标准溶液：2μL/mL；甲苯标准溶液：2μL/mL；苯、甲苯标准溶液：10μL/mL；苯、甲苯混合样品；甲醇（色谱纯）。 【实验内容与步骤】 1、选择色谱条件： 控制流速为1.0mL/min；检测波长254nm；先调配比系数为80%。 在设定色谱条件下，用微量注射器注入10μL/mL的苯、甲苯标准溶液5μL(注射器用甲醇润洗3～5遍)，观察锋面积和保留时间 ；再改变配比系数，设为85%，再用微量注射器注入10μL/mL的苯、甲苯标准溶液5μL，对比观察锋面积和保留时间，确定使用85%配比系数为最佳条件。 2、苯，甲苯定性分析 用微量注射器分别注入2μL/mL的苯标准溶液5μL，和2μL/mL的甲苯标准溶液5μL，注射器垂直插入进样口，插到不能插，逆时针转动六通阀，注入液体，再将六通阀转回原位。这是开始记录数据了。观察记录保留时间，确定苯和甲苯的峰。 3．苯、甲苯定量分析 在最佳条件下，用微量注射器分别进样5μL 的1μL/mL、2μL/mL、4μL/mL、10μL/mL、2μL/mL、4μL/mL、10μL/mL苯和甲苯的标准溶液，注射器垂直插入进样口，插到不能插，逆时针转动六通阀，注入液体，再将六通阀转回原位，这时开始记录数据。再按上述方法测待测样品的峰面积，根据峰面积在工作曲线上查出苯和甲苯待侧液的浓度，并计算试样中苯和甲苯的含量。 【实验数据与分析】 一、色谱条件优化 二、定性分析 样品 苯 甲苯 保留时间 3.180 3.881 定量分析 苯、甲苯混合标准溶液浓度分别为：1 ul/ml, 2 ul/ml, 5ul/ml, 10 ul/ml。 苯 甲苯 浓度 峰面积 浓度 峰面积 1 μL/mL 164290 1 μL/mL 358256 2 μL/mL 347434 2 μL/mL 664691 5 μL/mL 800939 5 μL/mL 1482945 10 μL/mL 1596645 10 μL/mL 2657726 Y = aX + b a = 157926.9 b = 16656.24 R^2 = 0.9997073 R = 0.9998536 Y = aX + b a = 253945.7 b = 148148.8 R^2 = 0.9977508 R = 0.9988748 未知样品浓度 未知样品 苯 甲苯 浓度 4.4 μL/mL 4.2 μL/mL 【实验问题与讨论】 1、在选择溶剂时，要通过反复实验配比系数来达到最佳条件，首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。 2、在改变配比系数时应使流动相冲洗固定相至谱线走至基线方可开始检测。 80% 85% 苯 甲苯 10 ul/ml 1ul/ml