【医学课件】 ELISPOT技术在乙型肝炎病毒(HBV)感染研究中的应用.pptVIP

ELISPOT技术在乙型肝炎病毒（HBV）感染研究中的应用 首都医科大学附属北京佑安医院 闫惠平 研究员，博士生导师 Margolis HS et al. Semin Liver Dis 1991; 11: 84–92. 乙肝病毒携带者流行分布 (3.6亿慢性乙肝病毒携带者): 2% – 低流行区 2–7% – 中度流行区 8% – 高流行区 乙肝病毒携带者的流行分布 HBsAg流行率在中国的地区分布 江西 山西 重庆 HBsAg流行率 黑龙江 吉林 辽宁 内蒙古 北京 天津 河北 山东 江苏 上海 浙江 台湾 福建 广东 海南 广西 云南 贵州 四川 西藏 新疆 青海 甘肃 宁夏 陕西 河南 湖北 湖南 安徽 1992年全国病毒性肝炎血清流行病学调查 8% 高流行区 2%~7% 中度流行区 HBV 携带者全球性分布 HBs Ag 携带者的分布 1% 1-10% 10% 少见 HCC 每年发病率 每 100,000 人 1-3 3-10 10-150 少见 HBV 携带者地理分布与肝细胞癌(HCC)发病率 HBV感染的流行情况及其严重性 ?全世界HBV 感染者: 3.6亿 ?中国HBV感染者: 1.3亿(2004年流行病学调查，HBsAg阳性率为8.22％,接种乙肝疫苗人群为4.51％，非免疫人群为9.51％)。 ? 慢性乙型肝炎: 3 000 万 - 5年后，约12%-25%发展为肝硬化,约20％-23%发展为失代偿肝硬化。约6%-15%肝硬化可发展为肝细胞癌(HCC) - 国内80%肝细胞性肝癌与HBV感染相关 ? 每年死于乙肝相关肝病及肝癌约30-50万人 Adapted from Feitelson. Lab Invest, 1994, and from EASL Consensus Statement. J Hepato, 2003, 39 (S1):S3-25 HBV infection 急性肝炎 慢性肝炎 重型肝炎（急性、亚急性、慢性） 慢性HBV携带者 乙肝后肝硬化 原发性肝癌 隐性感染(既往感染) HBV实验室诊断 生化：ALT， AST，Tbil， ALP， TP等 凝血： 病原学检测： HBsAg，抗-HBs， HBeAg，抗-HBe， 抗-HBc HBV DNA 缺少细胞免疫功能监测指标 ELISPOT---细胞免疫学技术 从单细胞水平检测分泌抗体的细胞或分泌细胞因子的细胞, 从单细胞水平评价机体的细胞免疫或体液免疫功能 不仅适用于特异性T细胞应答的检测 也可用于特异性B细胞应答的分析 HBV的感染及复制过程 HBV cccDNA 每个感染肝细胞核中含30~40cps， 形成稳定的 cccDNA 池 (Minichromosome) 当前尚无任何药物能直接作用于cccDNA 抑制HBV复制的药物即使长期应用很难 清除 cccDNA Blackberg J et al. J Hepatology 2000; 33(6):992 Komori M et al. J Hepatology 2001; 35(6):798 Lewin S et al. Antiviral Research 2002; 55:381 佑安医院初步研究 研究目的 通过观察乙型肝炎病毒（HBV）特异性多肽刺激外周血单个核细胞（PBMC）产生IFN-γ的能力，分析慢性乙型肝炎患者、慢性乙型重型肝炎患者及隐性感染者体内特异性T细胞免疫应答的差异和作用。 材料和方法 病例分组 慢性乙型肝炎组（CHB）20例 慢性乙型重型肝炎组（CSH）10例 正常对照组1（N1，隐性HBV感染者）6例 正常对照组2（N2，正常献血员） 10例 研究方法 合成四条HLA-A2限制的HBV特异CTL抗原表位肽作为刺激抗原。 表面抗原蛋白Te28-39（简称Te1） 表面抗原蛋白Te1