基因工程大作业.docx

川芎甜菜碱醛脱氢酶基因的真核表达载体构建说明书 姓名： 陈艳红 学号：级： 生工3班目录前言3一．宿主4二．表达载体……………………………………………………………………………………………4 1.载体选择…………………………………………………………………………………………42.载体背景介绍…………………………………………………………………………………43.PBI121载体图谱………………………………………………………………………………5 4.PBI121相关位点图谱………………………………………………………………………6 5.载体在NCBI中的信息……………………………………………………………………-6三．目的基因…………………………………………………………….. ……………………………91．背景资料…………………………………………………………... …………………………9 2.研究目的…………………………………………………………….. .. ………………………10 3．基因序列…………………………………………………………….. .. .. …………………10四．酶切位点………………………………………………………….. ………………………………15 1.酶切位点的选择………………………………………………………………………………15 2. 酶切位点的说明……………………………………………………. ………………………15五．引物设计与合成…………………………………………………………………………………161.引物设计说明…………………………………………………………………………………………162.引物设计…………………………………………………………………………………………………173.引物评价…………………………………………………………………………………………………184.加入酶切位点…………………………………………………………………………………………19六．过程………………………………………………………………………………………………………191.目的基因的获得…………………………………………………………………………………………192.目的基因的PCR扩增…………………………………………………………………………………203.载体的制备…………………………………………………………………………………………………204.构建重组质粒………………………………………………………………………………………………215.转化子鉴定……………………………………………………………………………………………………216.受体材料的准备与预培养……………………………………………………………………………227．根癌农杆菌培养……………………………………………………………………………………………228.侵染…………………………………………………………………………………………………………………229.共培养………………………………………………………………………………………………………………2210.选择培养…………………………………………….. …………………………………………………………2211.继代选择培养………………………………………………….. ……………………………………………2212．生根培养………………………………………………………………………………….. …………………23前言本次的真核表达载体构建选择川芎甜菜碱醛脱氢酶基因（BADH）作为目的基因，主要是基于我有幸参加了西南交通大学第七期SRTP项目《川芎的甜菜碱醛脱氢酶基因的真核表达载体的构建及表达研究 》。在准备项目的过程中，阅读了大量有关川芎甜菜碱醛脱氢酶基因（BADH），PBI121载体以及真核表达载体构建的文献，故对相关知识已经有所了解和掌握 。由于甜菜碱能够提高植物对胁迫的耐受性，且其合成途径比较简单，遗传操作比较方便，因此甜菜碱合成酶基因被看作是最有希望的胁迫抗性基因之一。迄今为止，已有不少植物被成功地导入了BADH 基因，并在不同程度上提高了植物的抗逆性。本研究希望获得川芎BADH基因，利用川芎BADH基因的开放阅读框与组成型启动子CaMV35S融合的重组表达载体，构建植物表达载体，利用根癌农杆菌介导转化烟草，获得转基因烟草，并研究该基因的功能，探讨川芎BADH基因与其抗逆性之间的关系，具有较大的实际应用价值。在此次构建真核表达载体的过程中，先后遇到了不同的问题。比如引物设计、重组质粒的构建及转化等。在此，我要感谢《基因工程》课程老师郭泰林老师以及SRTP项目指导老师周嘉裕老师的悉心指导。同时，本说明书中依然存在很多不足与错误的地方，敬请郭老师斧正。宿