高效液相色谱法测定蔬果中的Vc含量.docVIP

高效液相色谱法测定食品中的Vc含量 【实验目的】 （1）掌握高效液相色谱法操作方法和分析方法； （2）掌握VC高效液相分离定量的方法。 【实验原理】 维生素C是一种水溶性维生素。Vc在果蔬中普遍存在，尤其是柑桔类水果中含量较高。樱桃、番石榴、辣椒、猕猴桃等水果中Vc含量在50-300 mg/100 g。本实验对食品中的Vc提取后，采用高效液相色谱进行分析，以Vc标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度做校准曲线，根据样品中Vc的峰面积，由校准曲线计算其浓度。 【仪器试剂】 1. 仪器 Waters高效液相色谱仪；Waters 1525泵； Waters 2487双通道紫外检测器； Breeze色谱系统管理工作站, 色谱柱: Symetry- C 18柱( 10cm ×4.6mm, 5μm)；进样器。 【仪器试剂】 1. 仪器 高效液相色谱仪：；色谱柱：依利特或Phenomenex C18柱 (250 mm×4.6 mm, I.D.5 μm)；进样针。 2. 试剂 甲醇（色谱纯），草酸，维生素C等均为分析纯；实验用水为超纯水。 3. 色谱条件 高效液相色谱的条件为：0．1％ (体积分数)的草酸水液为流动相，流速为1 mL／min，检测波长254nm，进样量20μL，柱温25℃ 。 【实验步骤】 （1）按泵、柱温箱、检测器、工作站的顺序开启液相色谱仪，设定方法参数。 （2）用甲醇冲洗泵后，用流动相平衡系统。 （3）样品准备：萃取液过滤后用1 mol/L乙酸溶液定容至100mL，制成供试品溶液。 （3）定性分析：分别取20 μL Vc标准工作溶液和待测样品溶液，进HPLC分析。根据保留时间定性分析蔬果中的Vc。 （4）校准曲线绘制： 以Vc色谱峰面积对浓度作图，绘制校准曲线。 （全班只要定容一组） （5） 定量分析：供试品溶液经0.45 μm微孔滤膜过滤后进行HPLC分析。平行测定2次，记录其Vc的色谱峰面积，根据校准曲线计算蔬果样品中Vc的含量，结果以mg/100 g表示。 （6）实验结束后，用甲醇冲洗好色谱柱，按要求关闭仪器。 关于这个实验的思考： （1、比较流动相 2、用紫外可见扫描最大吸收波长 3、定性分析）