白酒酿造工演讲稿幻灯片.ppt

* 宏基因组学(metagenome)是分子生物学技术应用于微生物生态学研究领域而形成的一个新概念和重要的生物资源，环境基因组学研究所取得的成果，为揭示微生物生态系统功能及其分子基础，提供了更全面的遗传信息，为微生物新功能基因的筛选、开发提供了物质基础。 ４、富集培养法 　　富集培养法的方法和原理非常简单。我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。所创造的条件包括选择最适的碳源、能源、温度、光、pH、渗透压和氢受体等。在相同的培养基和培养条件下，经过多次重复移种，最后富集的菌株很容易在固体培养基上长出单菌落。 ５、厌氧法 　　在实验室中，为了分离某些厌氧菌，可以利用装有原培养基的试管作为培养容器，把这支试管放在沸水浴中加热数分钟，以便逐出培养基中的溶解氧。然后快速冷却，并进行接种。接种后，加入无菌的石蜡于培养基表面，使培养基与空气隔绝。另一种方法是，在接种后，利用N2或CO2取代培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。有时为了更有效地分离某些厌氧菌，可以把所分离的样品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中。 其他培养方法 提高微生物可培养性的方式可分为两大类，即改进培养措施和开发新型培养技术。改进培养措施主要采用减少毒性氧物质的毒害作用、维持微生物间的相互作用、供应新型的电子供体和受体、分散微生物细胞、延长培养时间、利用琼脂替代物等方法。新型培养技术主要包括稀释培养法和高通量培养法、扩散盒培养法、细胞包囊法、序列引导分离技术等。 新的微生物培养技术 2.3 分子生物学技术在现代白酒微生物研究的应用 原理 分子生物学技术在白酒微生物研究的应用 研究方法 16S rRNA基因与系统发育树 张文学等利用免培养法提取浓香型白酒曲药中细菌的总DNA在分子水平上运用PCR扩增技术和16S rDNA序列同源性分析等方法测定曲药中细菌的16S rDNA基因近全序列，并建立系统发育树图。结果表明，组成该曲药中 的细菌分属于Delftia、Dysgonomonas、Bacteroidetes、Proteobacterium、Nocardiopsi、Pseudomonas和A rthrobacter几大类群，表现出高度的细菌多样性用。 分子生物学技术在白酒微生物研究的应用 张文学等还利用18S rDNA片断克隆分析和同源性比较，研究发现，浓香型白酒窖池中心糟醅中存在Torulaspora、Talaromyces、Issatchenkia、Saccharomycopsis、Trichosporon、Eurotium、Aspergillus、Zygosaccharomyces、Fomitopsis等9个真菌分类属，最主要类群是Issatchenkia、Talaromyces、Aspergillus和Eurotium等4属，并阐述了各菌属在发酵前中后期的变化情况。同时他们还发现好氧性霉菌在发酵中后期的较大量存在和一定程度 升，提出发酵中后期窖池厌氧程度并非在逐渐增加和好氧性堪 细胞内存在氧化磷酸化耦合机制，以提供霉菌所需要的分子氧两种假设。 王海燕等对白酒窖池发酵的全程跟踪取样，借助于PCR-变性梯度凝胶电泳(DGGE)和16S rRNA基因文库两种方法，对比研究了江苏地区浓香型和芝麻香型白酒酒醅在发酵过程中的微生物菌群结构。DGGE图谱分析显示，随着发酵时间的延长，酒醅中的微生物多样性不断降低；发酵结束时Lactobacillus manihotivorans成为最主要的优势菌种。16S rRNA克隆文库的测序结果在数据库中进行比对后表明，浓香型和芝麻香型酒醅中的微生物种属存在巨大差异，仅有Weissella、Bacillus、Acetobacter和Lactobacillus 4个属的微生物在两个文库中均能检测到，发现并鉴定出在白酒曲药和酒醅的研究中尚未报道的细菌属。 2.3.1 基于PCR的群落分析技术：ARDRA ARDRA(核糖体DNA扩增片段限制性内切酶分析, Amplifed Ribosomal DNA Restriction Analysis) 通过对不同带型的克隆子的测序和不同类群克隆子数量的统计分析，确定环境中各微生物种群的相对丰度和群落组成。 细菌16S rRNA基因文库克隆子MspI酶切图谱 优点：快速，可较为详尽的获得所研样品的微生物群落结构信息。 缺点：适合于研究较少的样品，且步骤较繁琐。 2.3.2 基于PCR的指纹技术：DGGE 优点：快速，可同时分析多个样品间微生物群落差异 缺点：存在一定技术上的问题，只能获得主要微生物类群的信息，重复性较差 2.3.3 基于PCR的指纹技术：T-RFLP 优点：快速，可