第九章节环境监测中的微生物学方法幻灯片.pptVIP

2 滤膜法 发酵法全部检测需要的时间较长，为缩短时间，可以采用滤膜法，其步骤为： 1）水样过滤：选用具有微孔的滤膜，灭菌后通过抽滤一定量的待测水样，将水中的细菌截留在无菌滤膜上； 2）培养：将滤膜有菌面朝上贴于特定的固体培养基平板上（伊红美兰培养基或远藤氏培养基），经37oC培养16hr~18hr； 3）结果观察： 培养16hr~18hr后，挑选深红色或紫红色、不带或带有金属光泽的菌落，或者淡红色、中心色较深的菌落进行革兰氏染色观察，确定大肠菌群细菌。 G- ：接入乳糖培养液中，复发酵； G+：阴性结果。 经染色证实为G-无芽孢杆菌者，再接入乳糖蛋白胨半固体培养基中，37oC培养6~8hr，产气者判定为大肠菌群阳性。 4）结果计算： 根据滤膜上证实的大肠菌群数及滤过水量，求出1L水中的大肠菌群数量。 计算公式： 总大肠菌群数 = 滤膜上的菌落数以20~60个/片为适宜。 5）评价报告： 根据测定的数值写出检测水样的细菌学检测结果，予以评价。 滤膜上生长菌落数 × 1000 过滤水样量（mL） 滤膜法的优点： 省时、省料、设备要求低； 可以采集较多的检验水样。 局限性： 易受悬浮物干扰； 受其它细菌的干扰； 受水样中毒物的干扰。 当环境受到污染后，环境的 物理、化学性质 生物学特性 如： 重金属离子、NO3- 浓度增加； 水体污染变质，水生生物种类减少，甚至灭绝； 发生变化 如何监测？ 化学方法：快速、定性定量反映污染物浓度，但为瞬时值； 生物学方法：利用生物种类、数量的变化，生物学特性的改变来监测污染物对环境的影响。 可监测到污染物对环境的综合影响，但不易精确反映污染物的性质、浓度和数量。 第一节 空气的卫生学检验 一、空气微生物的卫生标准 空气不是微生物生存的最佳环境，却是微生物传播的重要媒介。 目前，还无统一的关于空气的卫生学指标，一般以室内1m3 空气中细菌总数为50~1,000个以上作为空气污染的指标。 场所 畜舍 宿舍 城市街道 市区公园 海洋上空 北纬80o 微生物 1~2?106 2×104 5×103 200 1~2 0 表2-1 不同场所上空微生物的数量（个/m3 ） 表2-2 以细菌总数评价空气的卫生标准（个/m3 ） 清洁程度 细菌总数 最清洁的空气（有空调） 1~2 清洁空气 30 普通空气 31~125 临界环境 ~150 轻度污染 300 严重污染 301 二、空气的微生物监测 通常采用营养琼脂平板计数法。 我国检测空气微生物所用的培养皿直径为d90mm，有用d100mm的。 评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。测定的细菌指标有细菌总数和绿色链球菌，在必要时则测病源微生物。 (一)空气微生物的测定方法 1．固体法 固体法有平皿落菌法(沉降—平板法)、撞击法(有缝隙采样器、筛板采样器、针孔采样器)和过滤法。 (1)平皿落菌法：将营养琼脂培养基融化倒人d90mm无菌平皿中制成平板。将它放在待测点(通常设5个测点)，打开皿盖暴露于空气5~10min，以待空气微生物降落在平板表面上，盖好皿盖，置于培养箱中培养48h后取出计菌落数，即为落菌数。 可通过前苏联奥梅梁斯基公式换算出浮游细菌数。奥氏认为：5 min内落在面积100cm2营养琼脂平板上的细菌数和10L空气中所含的细菌数相同。 奥氏公式： 式中：C—空气细菌数； A——捕集面积，cm2 ； t ——暴露时间，min； N——菌落数，个。 t 5 A 100 1000 100 × N × × C = 简化后的奥氏公式： 经测定发现，用奥式公式计算的浮游细菌数比实测的浮游细菌少。 此公式没有考虑尘埃粒子大小、数量、气流情况、人员密度和活动情况。 C = 1000×50N A×t (2)撞击法： 以缝隙采样器为例，用吸风机或真空泵将含菌空气以一定流速穿过狭缝(狭缝宽有0.15 mm、0.33 mm和1 mm三种)而被抽吸到营养琼脂培养基平板上。狭缝长度为平皿的半径，平板与缝的间隙有2mm，平板以一定的转速(1 r／min、5-60r／min、60r／min)旋转。 通常平板转动一周，取出置于37℃恒温箱中培养48h，根据空气中微生物的密度可调节平板转动的速度。采集含菌高的空气样品时，平板转动的速度要比含菌量低的空气样品的转速快。根据取样时间和空气流量算出单位空气中的含菌量。采样器的规格各国不一，可按说明书操作。 撞击法检测空气中微生物数量 培养前 培养后 2 液体法 液体法用于测定空气中的浮游微生物，主要是浮游细菌。该法将一定体积的含菌空气通入无菌蒸馏水或无菌液体培养基中，