2018届 二轮复习 基因工程和克隆技术 学案（江苏专用）.doc

2018届 二轮复习 基因工程和克隆技术 学案 一、基因工程 1．基因工程的基本工具(填) 2．基因工程的基本操作程序(填空) (1)目的基因的获取途径： 方法 具体操作 直接分离 从自然界已有的物种中分离，如从基因文库中获取 人 工 合 成 化学 合成 已知核苷酸序列的较小基因，直接利用DNA合成仪用化学方法合成，不需要模板 逆转 录法 以RNA为模板，在逆转录酶作用下人工合成 PCR 技术 扩增 原理：DNA复制条件：模板DNA、引物、脱氧核苷酸、热稳定的DNA聚合酶 (2)基因表达载体的构建——重组质粒的构建： 表达载体的组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因＋复制原点。 启动子和终止子：启动子是RNA聚合酶结合位点，启动转录；终止子是终止转录的位点。 (3)将目的基因导入受体细胞： 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 显微注射技术 感受态细胞法(用Ca2＋处理) 受体细胞 受精卵、体细胞 受精卵 原核细胞 (4)目的基因的检测与鉴定： 导入检测：DNA分子杂交技术(使用DNA探针)。 表达检测 个体生物学水平鉴定：如对转基因作物进行抗虫或抗病等接种实验。 3．蛋白质工程(填) 二、细胞工程 1．植物细胞工程的基本技术(填) 2．动物细胞培养(填) 3．动物细胞核移植技术(填) 4．动物细胞融合与单克隆抗体(填) [考什么———————考点·考法探究] 考点(一)　基因工程的操作工具、原理及应用 1.将经过扩增的DNA和质粒用相同的限制酶进行如右图所示的切割，电泳得到纯净的B片段和D片段，将两种片段置于适宜的缓冲液中用DNA连接酶处理。如果只考虑两个片段的环状连接，则能形成不同核苷酸序列的环状DNA的种类是(　　) A．6种　　　　　　　　 B．3种 C．2种 D．1种 解析：选A　只考虑两个片段的环状连接，能形成的环状DNA有B片段与B片段同向连接的、B片段与B片段反向连接的、D片段与D片段同向连接的、D片段与D片段反向连接的、B片段与D片段同向连接的及B片段与D片段反向连接的，共6种。 (1)基因工程中有3种工具，但工具酶只有2种。限制酶是一类酶，不是一种酶。限制酶的成分为蛋白质，其作用的发挥需要适宜的理化条件，高温、强酸或强碱均易使之变性失活。 (2)在切割含目的基因的DNA分子时，需用限制酶切割两次此DNA分子，产生4个末端。 (3)限制酶和DNA连接酶的作用部位都是脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键(不是氢键), 只是一个切开，一个连接。限制酶不切割自身DNA的原因是：原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。 (4)限制酶切割位点所处的位置必须是在所需的标记基因之外，这样才能保证标记基因的完整性，有利于对目的基因的检测。 (5)为使目的基因与载体形成相同的DNA片段末端连接，通常使用同一种限制酶将二者切割，但如果不同的限制酶切割DNA分子所产生的末端也存在互补关系时，则两末端也可连接。用两种限制酶分别切割质粒和目的基因，这样可避免质粒和质粒之间、目的基因和目的基因之间的连接。 2．(2017·江苏高考)金属硫蛋白(MT)是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题： (1)从高表达MT蛋白的生物组织中提取mRNA，通过________获得________用于PCR扩增。 (2)设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物(引物1和引物2)，为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的________________位点。设计引物时需要避免引物之间形成________________，而造成引物自连。 (3)图中步骤1代表________，步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。 (4)PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏________________的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但________的引物需要设定更高的退火温度。 (5)如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有________(填序号：升高退火温度　降低退火温度　重新设计引物)。 解析：(1)PCR技术可在体外对DNA进行扩增，模板可以是mRNA经过逆转录获得的cDNA。(2)设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物(引物1和引物2)时，需在引物中增加适当的限制性核酸内切酶的识别序列，便于目的基因与质粒的连接。为了避免引物自连，设计引物时需要避免引物之间形成碱基互补配对。(3)根据PCR的过程可知，图中步骤1为变性，步骤2为退火(复性)，步