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西北农林科技大学动物医学院 2012届（本科）毕业生论文开题报告 题目：建立关于羊口疮病毒多重PCR检测方法 学 院：动物医学院 专 业 班 级：动物医学专业07级3班 学 生 姓 名：周可可 指 导 教 师：张淼涛 论文通过开题论证日期： 2012 年 3 月 15 日 开题论证教师签名： 目 录 1.选题的目的意义： 3 2.选题依据 3 2.1 3 2.2 3 2.3 3 3. 研究现状 3 3.1 B2L 4 3.2 FIL 4 3.3 VIR 4 3.4 virus FIL-10 4 3.5 GIF 4 3.6 VEGF 4 4.研究内容 5 4.1 5 4.2 5 5.研究方法和技术路线 5 5.1 5 5.1.1 5 5.1.2 5 5.1.3 5 5.1.4 5 5.2 5 5.3 5 5.4 5 5.5 5 6.预期结果 6 7.研究创新点 6 8.实验所需的主要仪器设备和试剂 7 8.1 仪器设备 7 8.2 试剂 7 9.论文工作进展安排 7 10.经费预算 7 11.实验中遇到的困难及解决的办法 8 11.1遇到的困难 8 11.2解决办法 8 12.参考文献 8 1.选题的目的意义：羊口疮是由羊口疮病毒(Orf virus ,ORFV )引起的绵羊、山羊等中小型反刍动物的一种急性、病毒性、嗜皮性传染病，主要在羊口唇、舌、鼻、乳房等部位皮肤与粘膜形成水疱、丘疹、脓疱、溃疡和结痂，也可通过接触患病动物皮肤或病原污染物而引起人类的发病,患者多表现为手指等部位的亚急性皮肤感染(Key S J ,et al. 2007) 。 在羊群中，通常50%以上的羊都发生感染，在敏感羊群中发病率高达90%。对于年羊来说，羊口疮的死亡率不高，但是由于感染率高，尤其是反复感染和继发感染，造成羊采食困难，精神沉郁，从而影响羊的生长发育以及泌乳等，给养羊业造成潜在的经济损失。羊口疮对羔羊的影响最大（GUO，et al. 2003），主要引起羔羊严重的采食问题从而使羔羊因饥饿而死亡，直接导致经济效益下降。羊口疮病原学调查有利于了解各地羊群中的带毒状况，及时隔离治疗，从而有效地预防疾病，减少经济损失。2.选题依据2.1 羊口疮是群体性接触性传染病，在羊群中的爆发很常见，而且有反复感染以及继发性细菌感染，给羊群造成影响。 2.2 羊口疮分子病原学调查对了解各地奶山羊带毒情况及其重要，可以有效地预测羊口疮发病情况，及时采取有效地防御措施。 2.3 多重PCR检测能够更精确的检测病毒，同时更具有特异性。 3 研究现状 羊口疮病毒为线性双股DNA，在分类学上．属于痘病毒科副痘病毒属．能引起反刍动物和人发病．在我国西部地区流行比较广泛．是家畜疫病防控中重要的一种病原。 羊口疮病毒的基因组ORFV基因组庞大，为线性双股DNA，分子量约为88．8×106 Da。ORFV基因组长约130～150kb，然而不同毒株长度有10～25 kb的差异。Rob-inson等用限制性酶切片段多态性分析(RFLP)方法对11株新西兰分离株分析的结果表明，基因全长约为140 kb；Gassmann等的研究结果表明，10株欧洲分离株基因全长约为138.2～141.2 kb。多数学者认为ORFV包括130个基因，其中127个为线性基因，ORFV基因组包括位于两末端的反向末端重复序列(ITR)和中间的一个大的编码区(Cottone R,et al. 1998)，与痘病毒科其他成员相似。病毒基因组的两端由ITR形成闭合环状发夹结构，并且ITR中存在0.5～1kb的变异片段。临近发夹结构处，有一段小于100bp的高度保守序列，其序列是决定DNA复制所必需的。中间区域基因相对保守(Robinson，et al. 1987)。一般认为ORFV基因组的两端包括一些与病毒的毒力、宿主范围、免疫逃避及免疫调节有关的基因，具有病毒种属特异性(Delhon，et al. 2004)。基因组内部结构(即保守区DNA序列)包括一些与病毒在细胞中复制和病毒粒子在细胞浆中装配成熟有关的基因。 羊口疮病毒感染机体后，分泌各种免疫调节毒力因子干涉宿主的免疫机制。羊口疮病毒在宿主体内产生的干扰素结合蛋白，粒细胞巨噬细胞集落刺激因子抑制因子，肝素结合蛋白，羊口疮白介素10以及趋化因子结合蛋白等造成免疫逃避，造成羊群经常出现二次感染。目前还没有针对羊口疮病毒的早期检测方法，大多数学者都是在疾病爆发后对病毒进行检测并对疾病进行确定。 3.1 B2L B2L基因作为ORFV外膜蛋白基因，编码大小约为