脆性x综合征.ppt.ppt

脆性X综合征 唐新华 云南省第一人民医院遗传诊断中心 脆性X综合征 脆性X综合征（Fragile X Syndrome）,又称Martin-Bell 综合征，是一种常见的导致家族性智力障碍的遗传病之一。 是仅次于唐氏综合征引起男性智力发育障碍的第二大主因。 发病率：男性中1/4000-9000 女性中1/7000-15000 致病基因定位：Xq27.3 脆性X综合征临床表现（男性） 智力发育落后 语言反复。。。 极度活跃或抑郁 方额，长脸 大耳朵 大下颌 大睾丸 女性脆性X携带者的临床表现 大约35-60%的女性携带者表现出轻度或重度的智力低下。 无纯合子报道。 脆性X综合征的诊断 临床症状 家系分析 检查： 普通外周血染色体检查、脆性X染色体检查、 分子生物学基因诊断、 X染色体上与低智力相关的基因 脆性X综合征染色体检查 脆性位点是在特定的培养条件下，染色体上非随机出现的不着色的裂隙或断裂。 脆性位点总是恒定的出现在某一染色体的同一位置上，具有遗传性。 大部分比较常见的位点，不能作为遗传标记。在某些个体或家系中，会携带一些比较少见的染色体脆性部位，可视为遗传标记进行家系遗传分析。 Xq27 ～ q28 区域的脆性位点研究迄今发现的26种罕见脆性位点，只有Xq27 ～ q28 区域的脆性位点与遗传性疾病有关。 其它常染色体上的脆性位点尚未发现与某一疾病直接相关的。 脆性X综合征染色体检查 FraX 因与Xq27. 3 处叶酸敏感性脆性位点（FraXA）相关而命名。 在缺乏叶酸的培养环境中几乎所有的男性患者及约50% 的女性携带者可检测到该位点。 1990 年Sutherland 用特殊的诱导条件发现Xq27. 2 处有一个脆性位点：FraXD，并证明它是X 染色体上的一个正常结构。 1993 年Hirst 等证实在Xq27 ～ q28 区域的FraXE、FraXF 与人类智力低下有关，在细胞遗传学水平上不易与FraXA 位点鉴别。 这是细胞遗传学检查的缺点。需要分子生物学的检查来补充。 脆性X综合征染色体检查 Fra(X)(q27.3)在正常人的细胞中极少表达。 使用叶酸缺乏的培养基，或在培养基中加入抗叶酸的试剂（如trimethoprim甲氧苄胺嘧啶）,或者加入胸苷合成酶的抑制剂（如5’-氟尿嘧啶核苷FUdR或氨甲喋呤MTX），有时还加入咖啡因抑制DNA修复，均可以诱导Xq27.3脆性位点的表达。 脆性X综合征染色体检查方法文献来源：Human chromosomes principles and techiques, 作者Ram S. Verma/Arvind Babu 叶酸缺乏培养基诱导法： TC199培养基37℃中培养96小时，G-显带。碱性条件PH7.4-7.6，特别是收获前几个小时的条件很关键（拧松瓶盖）。血清不用5%，用2%。 使用胸苷合成酶的抑制剂诱导法： 在20%血清的RPMI 1640培养基中37℃中培养72小时，加入FUdR至终浓度0.1uM，或加入氨甲喋呤MTX至终浓度10ug/ml，再培养24小时后收获。血清浓度不关键。 FUdR和 MTX对细胞极毒，会降低分裂指数。培养期间，特别是收获前几小时碱性条件PH7.2-7.6关键。细胞密度越低脆性X的表达率越高，所以少接种一点血细胞。 脆性X综合征染色体检查方法文献来源：《产前诊断学》，朱俊真等，中国科技出版社 3.使用低叶酸培养基双诱导法：5%血清的TC199培养基中培养70-72h，加入FUdR至终浓度0.05ug/ml，继续培养17小时后，加入咖啡因至终浓度2.2ug/ml再培养6小时后收获，收获前2小时加秋碱。 注意：羊水、绒毛等细胞的脆性位点分析需要先将羊水细胞培养好贴壁后在诱导。 脆性X综合征染色体检查：脆性X染色体读片 染色体核型中出现标志性脆性位点如3p14的分裂相方可进一步分析有无Fra(X)(q27.3)表达，否则视为脆性位点诱导失败，需重做。 计数50-100个细胞，出现至少2个Fra(X)(q27.3)阳性的细胞方可诊断阳性：散发病例男性病例计数50个，女性患者计数100个。 核型描述：标出阳性细胞数 /正常细胞数的比例，无Fra(X)(q27.3)表达，也要标注出0/正常细胞数。 脆性X综合征染色体检查可能出现假阴性结果。无Fra(X)(q27.3)表达，其它的检查更重要。 脆性X染色体阳性的病例 脆性X染色体阳性的病例 脆性X综合征基因诊断 不同的疾病，不同的策略。不同的疾病具有不同的遗传学病因，诊断选用的分子生物学技术也大不相同。 在Fra X 存在不发病的男性携带者，不是简单的X连锁隐性遗传病。和DMD比较...... 脆性X相关的基因： 脆性X综合征分子生物学