大学生物化学 蛋白质化学-1教学教材.pptVIP

§1.2 蛋白质的分子组成——氨基酸 2、氨基酸的两性电离及等电点 氨基酸既含有氨基，可接受H+，又含有羧基，可电离出H+，所以氨基酸具有酸碱两性性质。通常情况下，氨基酸以两性离子的形式存在，如下图所示： §1.2 蛋白质的分子组成——氨基酸 氨基酸的水溶液既可被酸滴定，又可被碱滴定，应该具有两性电离的性质，现以甘氨酸为例来说明氨基酸两性电离的特点。 §1.2 蛋白质的分子组成——氨基酸 §1.2 蛋白质的分子组成——氨基酸 从上图可知：氨基酸在酸性环境中，主要以阳离子的形式存在，在碱性环境中，主要以阴离子的形式存在。在某一pH环境下，以两性离子（兼性离子）的形式存在。该pH称为该氨基酸的等电点。所以氨基酸的等电点可以定义为：氨基酸所带正负电荷相等时的溶液pH。 §1.2 蛋白质的分子组成——氨基酸 氨基酸的酸碱性质 氨基酸的等电点 pI 氨基酸的可解离基团的pK值 两个重要概念： 氨基酸的理化性质 氨基酸的酸碱性质 以谷氨酸为例: pI=1/2（pK1+pKR）＝1/2 (2.19+4.25)=3.22 氨基酸的理化性质 氨基酸等电点的计算 pI= 2 pK′1+pK′2 一氨基一羧基AA的等电点计算： pI= 2 pK′2+pK′R 二氨基一羧基AA的等电点计算： pI= 2 pK′1+pK′R 一氨基二羧基AA的等电点计算： 二氨基一羧基氨基酸——赖氨酸的解离情况 可见，氨基酸的pI值等于该氨基酸的两性离子状态两侧的基团pK′值之和的二分之一。 氨基酸的酸碱性质 氨基酸的每一功能基因可被酸碱所滴定， 可根据氨基酸的滴定曲线来推算pK值。 氨基酸的理化性质 氨基酸的酸碱性质 在等电点以上的任何pH，氨基酸带 净负电荷，在电场中将向正极移动； 结论： 在低于等电点的任何pH，氨基酸带 净正电荷，在电场中将向负极移动。 在一定pH范围内，氨基酸溶液的pH离 等电点愈远，氨基酸所携带的净电荷 愈大。 氨基酸的理化性质 (1)与茚三酮的反应：除脯氨酸与羟脯氨酸 外，可与其它氨基酸生成蓝紫色化合物。脯氨酸与羟脯氨酸为黄色化合物。 3、化学性质(α-氨基与α-羧基共同参加反应) §1.2 蛋白质的分子组成——氨基酸 §1.2 蛋白质的分子组成——氨基酸 (2) 与甲醛的反应：用过量的中性甲醛与氨基酸反应，可游离出氢离子，然后用NaOH滴定，从消耗的碱量可以计算出氨基酸的含量。此法称为间接滴定法。 §1.2 蛋白质的分子组成——氨基酸 氨基酸的化学反应 ①与亚硝酸反应 含游离α-氨基的氨基酸能与亚硝酸起反应，定量地放出氮气，氨基酸被氧化成羟酸。 含亚氨酸的脯氨酸则不能 与亚硝酸反应。 氨基酸的理化性1） α-氨基参加的反应 氨基酸的化学反应 测定N2 的体积，即可算出氨基酸的含量。 Van Slyke 氨基氮测定法就是根据此反应原理。 氨基酸的理化性质 烃基化反应： 氨基酸与2,4一二硝基氟苯(DNFB)的反应 （sanger反应） DNFB（dinitrofiuorobenzene） DNP-AA(黄色) + + HF 弱硷中 氨基酸 2，4-二硝基氟苯 氨基酸与苯异硫氰酯（PITC）的反应（Edman反应） PITC（phenylisothiocyanate） + 苯乙内酰硫脲衍生物(PTH-AA) （phenylisothiohydantion-AA） 弱硷中 (400 C) (硝基甲烷 400 C) H+ (3) 与2,4-二硝基氟苯（2,4-DNFB）的反应（Sanger反应）： 生成黄色的二硝基苯-氨基酸衍生物。 (4) 与苯异硫氰酸酯（PITC）反应（Edman反应）：生成苯乙 内酰硫脲-氨基酸。 (5) 与丹磺酰氯（DNS-Cl）的反应：生成荧光物质DNS-氨基酸。 （3）、(4)、(5)反应用于蛋白质的N-末端的测定。 §1.2 蛋白质的分子组成——氨基酸 1)、成盐： 羧基与碱作用成盐 α-羧基参加的反应： 2）成酯反应 氨基酸在盐酸气体的条件下与无水乙醇作用即产生氨基酸的乙酯。羧基变成甲酯、乙酯、成盐后羧基的化学性质即能被掩盖（羧基保护）。而氨基被活化，容易与酰基或烃基反应。 第四章 蛋白质化学 基础生物化学 蛋白质概论 【目的与要求】 掌握蛋白质的结构与功能的关系； 第一章 蛋白质化学 了解 蛋白质的主要功能、分类； 掌握基本氨基酸的结构特点，分离纯化的基本方法； 掌握 蛋白质的结构特点、基本性质－大分子性质、紫外吸收、颜色反应、变性作用、沉淀作用等； 掌握蛋白质的