[化学]高效液相色谱法.pptVIP

* 请选择内容 第一节 高效液相色谱的特点与仪器 feature and instrument of HPLC 第二节 主要的分离类型和原理 main separating types and principle 第三节 影响分离的因素与操作条件选择 factors influenced separation and choice of operation condition 结 束 * 本章作业 P184 6, 10 * * p154表10－1列出一些常用溶剂在氧化铝吸附剂中的?0值。在硅胶吸附剂中?0值的顺序相同，数值可换算（ ?0硅胶＝0.77× ?0氧化铝）。 * 液固吸附色谱适用于分离那些能溶解在非极性溶剂中、具有中等分子质量的非离子型（油溶性）的试样。 缺点：非线型等温吸附常引起峰的拖尾 * 二、 液－液分配色谱liquid-liquid partition chromatography 固定相与流动相均为液体（互不相溶） 1. 基本原理： 利用组分在互不相溶的两相间的分配系数K的不同，造成各组分的差速迁移而进行分离。 * 涂渍固定相：早期涂渍固定液，固定液易流失，现在较少采用； 化学键合固定相：将不同基团通过化学反应键合到硅胶（载体）表面的游离硅羟基上。 1. 疏水基团：如烷烃C8、C18和苯基等 2. 亲水基团：如氨基、氰基等 * 流动相：对于亲水性固定液，通常采用疏水性流动相，即固定相的极性大于流动相的极性，称为正相色谱；反之，固定相的极性小于流动相的极性的称为反相色谱。 正相色谱适用于极性化合物的分离。其流出顺序是极性小的先流出，极性大的后流出。 反相色谱适用于非极性化合物的分离，其流出顺序与正相色谱恰好相反。 * 3. 正相键合相色谱法 固定相采用极性的有机基团，CN、NH2、双羟基等键合在硅胶表面； 流动相采用非极性或极性小的溶剂（如烃类）中加入适量的极性溶剂（如氯仿、醇、乙醇等）。 它多用于分离异构体、极性不同的化合物，此时，组分的分配比k值随其极性的增加而增大，但随流动相极性的增加而降低。 * 4．反相健合相色谱法 固定相是采用极性较小的键合固定相，如硅胶－C18H37、硅胶－苯基等； 流动相是采用极性较强的溶剂，如甲醇、乙睛－水、水和无机盐的缓冲溶液等。 * 它多用于分离多环芳烃等低极性化合物；若采用含一定比例的甲醇或乙睛的水溶液为流动相，也可用于分离极性化合物；若采用水和无机盐的缓冲液为流动相，则可分离一些易离解的样品，如有机酸、有机碱、酚等。 反相键合相色谱法具有柱效高，能获得无拖尾色谱峰的优点。 * * 5. 离子对色谱法 将一种或多种与溶质离子电荷相反的离子加入到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合形成离子对，从而控制溶质的保留行为的一种色谱分离方法。 季铵盐离子对试剂，用于分离酸性物质； 烷基磺酸盐离子对试剂，用于分离碱性物质。 * 固定相：正相键合固定相；反相键合固定相。 流动相：一般含有适当有机反离子的溶剂。 组分的保留值取决于组分离子和离子对试剂生成配合物的平衡常数和反离子的浓度。 * 三、 离子交换色谱法ion-exchange chromatography 基本原理：利用组分在固定相上发生的离子交换反应。组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷等有关。亲和力大，保留时间长。 阳离子交换反应：R-－Y+ ＋ Mm+ ＝ R-－M+ ＋ Ym+ 阴离子交换反应：R+－Y- ＋ Xm- ＝ R+－X- ＋ Ym- * 固定相：阳离子交换树脂或阴离子交换树脂； 流动相：盐类的缓冲溶液。 常用的流动相有水、钠、钾、铵的柠檬酸盐、硼酸盐、醋酸盐与他们对应的酸混合成缓冲溶液。也可以加入有机溶剂，用于调节对组分的溶解度和选择性。 阳离子交换树脂：强酸性（-SO3H） 和弱酸性（-COOH） 阴离子交换树脂：强碱性（-CH2N(CH3)Cl） 和弱碱性（-CH2NH2） * 应用：对于离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸、肽类等。 在离子交换色谱中，常通过改变流动相缓冲溶液的种类、浓度及pH值等来控制k值，改变选择性。 * 四、 尺寸排阻色谱size-exclusion chromatography 原理：按分子大小分离。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外，出峰最快。 * 尺寸排阻色谱被广泛应用于大分子物质相对分子量的分布。它具有其他液相色谱所没有的特点：