第八章 植物脱毒技术.pptVIP

第八章 植物脱毒技术 主要内容 植物病毒为害和脱病毒机理 植物脱毒方法 脱病毒植物的检测和保存 第一节 植物病害和脱病毒机理 一、植物病毒分布和为害 1、植物病毒的地理分布 不同地区能导致同一种植物感病的病毒种类和优势小种不同 侵染大蒜的洋葱黄矮病毒（onion yellow dwarf virus, OYDV)在五大洲广泛传播，感病率自欧洲52％到亚洲86％。 2、病毒在植物体内的分布 植物病毒具有系统性侵染的特点，在植物体中除生长点外的各个部位均可带毒。 3、病毒对植物的为害 植株矮小，叶片失绿或变色，分蘖及枝芽增加，果、叶畸形等 为害：草莓病毒曾使日本草莓产量减产，几乎使草莓生产遭到灭顶之灾。 柑橘衰退病曾经毁灭了巴西大部分柑橘园，圣保罗州80％甜橙因病毒病死亡。 番木瓜的扭叶坏斑病使许多国家的番木瓜栽植一年即淘汰。 二、植物病毒的传播方式 1、有两种 介体传播：昆虫，螨类，线虫，真菌，菟丝子等 非介体传播：机械传播，无性繁殖材料和嫁接传播，种子和花粉传播 2、植物脱病毒的机理 病毒在植物体内分布不均匀，在受侵染的植株中，顶端分生组织无毒或含毒量极低。 茎尖培养主要用于消除病毒以及类病毒、细菌、真菌等。 三、植物脱病毒的意义 1、应用植物脱毒技术使植物复壮，明显提高产量、品质。 如：草莓脱毒苗，结果多，果实大，产量提高20％～30％。 马铃薯无病毒种薯，生长旺盛，增产40％以上。 许多观赏植物脱病毒苗植株生长健壮，花多且大，上等花增加，商品价值提高。 2、对减少污染，防止公害，保护环境都有积极的意义 第二节 植物脱毒方法 一、物理方法－－－热处理法 热处理法原理是当植物组织处于高于正常温度的环境中时，组织内部的病毒受热之后部分或全部钝化，在高温下，不能生成或生成病毒很少，而破坏却日趋严重，以致病毒含量不断降低，这样持续一段时间，病毒自行消灭，从而达到脱毒的目的。 (1)热水处理 适用于休眠器官、剪下的接穗或种植的材料，在50℃左右的温水中浸渍10min至数小时，方法简便易行，但易使材料受伤。 (2)热空气处理 热空气处理对活跃生长的茎尖效果较好，将生长的盆栽植株移入温热治疗室(箱)内，一般在35—40℃。处理时间因植物而异，短则几十分钟，长可达数月。 热处理方法主要缺陷是并非能脱除所有病毒，因此热处理需与其他方法配合应用，才可获得良好的效果。 二、通过茎尖培养消除毒素 1、外植体 茎尖（shoot tip)/茎的顶端分生组织 100～1000微米 即0.1~1厘米 2、方法 需用带有适当光源的简单解剖镜(8—40倍) 解剖针，解剖刀 在切取外植体之前一般须对茎芽进行表面消毒。叶片包被严紧的芽，如菊花、兰花，只须在75%酒精中浸蘸一下，而叶片包被松散的芽，则要用0.1%次氯酸钠表面消毒10min。 注意：剥离茎尖时，应尽快接种，茎尖暴露的时间应当越短越好，以防茎尖变干。 培养：将接好的茎尖置于22℃左右的温度下。每天以16h 2000—3000lx的光照条件下培养。 由于在低温和短日照下，茎尖有可能进入休眠；所以较高的温度和充足的日照时间必须保证。 3、影响茎尖培养脱毒效果的因素 1）培养基 多用MS培养基 炭源：蔗糖或葡萄糖，2％～4％ 多用固体培养基 细胞分裂素可用Kt或 BA 生长素避免使用易促进愈伤组织化的2，4-D,宜换用稳定性较好的NAA或IBA 。 2）外植体的大小 外植体的大小决定茎尖的存活率 叶原基的存在与否也影响分生组织形成植株的能力，一般认为，叶原基能向分生组织提供生长和分化所必需的生长素和细胞分裂素。 3)培养条件 在茎尖培养中，光下培养的效果通常比暗培养效果好，如马铃薯茎尖培养时，当茎已长到1cm高时光照强度便增加到4000Lx。 4)外植体的生理状态 茎尖最好要由活跃生长的芽上切取，在香石竹和菊花中，培养顶芽茎尖比培养腋芽茎尖效果好。但在草莓中，二者没什么差别。取芽的时间也很重要，一般选作萌动期较好。否则采用某种适当的处理、打破休眠才能进行。 5)化学疗法 许多化学药品(包括嘌呤、嘧啶类似物、氨基酸、抗菌素等)对离体组织和原生质体具有脱毒效果。常用的药品有：8-氮鸟嘌呤、2-硫脲嘧啶、杀稻瘟抗菌素、放线菌素D、庆大霉素等。例如，将100ug2-硫脲嘧啶加入培养基可除去烟草愈伤组织中的PVY (马铃薯病毒)。 第三节 脱毒植株的检测和保存 一、脱病毒植株的检测 1、指示植物(indicating Plant)法 利用病毒在其他植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类的方法，就是枯斑和空斑的测定法。这种专门选用以产生局部病斑的寄主即为指示植物，又称鉴别寄主。它只能