纯化大肠杆菌的模拟操作.docVIP

纯化大肠杆菌的模拟操作 一、实验目的 1．知识和能力 （1）进一步掌握消毒灭菌、分离纯化的原理和方法 （2）尝试用牛肉膏蛋白胨固体培养基模拟进行大肠杆菌的纯化培养。 （3）掌握倒平板操作、平板划线操作、系列稀释操作以及涂布平板操作。 2．过程和方法 通过观看视频和观看老师的演示操作，模拟大肠杆菌的纯化培养，学会无菌操作以及微生物接种方法，提高动手操作能力。 3．情感态度与价值观 积极参与实验操作，通过体验，感受科学的严谨性，养成良好的科学研究素养。 二、教学对象与教学时间 1．教学对象：高学生 2．课时安排：节课 三、实验原理 1．培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素、能源和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基要选择合适的配比关系；选择合适的理化性质；配后要及时灭菌。牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。 2．。四、实验用品： 1．实验材料： 2．实验仪器：牛肉膏蛋白胨培养基的配方：牛肉膏 3g蛋白胨 10gNaCl 5g，琼脂 15—20g 水1000ml，pH 7.4—7.6 五、实验步骤：称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。分装按实验要求，可将配制的培养基分装入内。分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。加塞培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能（棉塞制作方法附本实验后面）。包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。灭菌121．3， 20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。70°角70°角七、组织教学的过程： 配制培养基配制培养基计算→称量→溶化→灭菌→倒平板接种平板划线法平板划线平板划线法70°角接种稀释涂布平板法l蒸馏水——分别编号——取1ml菌液——放入编号第1支试管——混匀菌液和水——从编号第1支试管取1ml菌液——放入编号第2支试管——混匀菌液和水——重复步骤，直到最后一支试管，此过程不进行实际操作。 指导学生观看涂布平板法的操作视频，完成操作流程图：准备涂布器——滴加菌液——引燃涂布器——均匀涂布菌液，思考每一步操作的目的或作用，并完成实际操作。 在老师的指导下，观察视频并与同学交流完成操作流程图，进行实际演练。 培养学生观察、动手能力，掌握稀释涂布平板法。 培养观察结果（菌落数量、特征等）并分析、评价无菌技术的操作微生物的培养70°角70°角对比分析培养基是否杂菌( ) A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质 B．培养基只有两类：液体培养基和固体培养基 C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基 D．微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌获得纯净培养物的关键是……………( ) A．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌 B．接种纯种细菌 C．适宜环境条件下培养D．防止外来杂菌的入侵制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的( ) A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板有关倒平板的操作错误的是…………( ) A．将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 B．使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰 C．将培养皿打开D．等待平板冷却凝固后需要倒过来放置有关平板划线操作正确的是…………( ) A．使用已灭菌