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体内药物分析 Biopharmaceutical analysis 体内药物分析概述 一、体内药物分析的定义 研究生物机体中药物及其代谢物和内源性物质的质和量变化规律的分析方法学。 药物分析, 法医鉴定, 毒物分析 二、体内药物分析的意义 （一）在新药评价和开发中的意义 1．全面质量控制 (毒奶粉事件) 药品三原则: 安全,合理和有效 2．新药报批 3．为设计新药提供信息 ①从代谢产物中开发新药(保泰松和羟基保泰松) ②前药设计 ③新剂型的研究，缓控释、经皮制剂等 以上内容必须通过测定体内药物浓度得以解决 1．血药浓度与药理作用 思考题:剂量增加, 药效是否成正比增加??? （二）临床合理用药中的意义 2. 影响血药浓度的因素 （1）机体因素 a．生理因素: 年龄、性别、生理状况（妊娠期） b．病理因素（胃肠道、肝脏、肾脏） c．遗传因素（乙酰基转移酶代谢异烟肼、乙醇脱氢酶） （2）药物因素 a．剂型因素（生物利用度问题） b．药物合并使用（酶抑、酶促） c．环境因素（环境污染、食品、个人精神状态） Company Logo 分析对象 Company Logo 药物在体内的形态 游离型代谢产物 游离型原药 结合型原药 结合型代谢产物 情形极为复杂 缀合物 分子间力结合 化学共价结合 称为 两类 四、体内药物分析的特点 1．干扰杂质多(内源性物质, 分离纯化) 2．样品浓度低(富集,净化) 3．取样量少 4．工作量大 5．时间短 6．有一定设备 五、体内药物分析方法 1.色谱分析法：TLC、、GC、HPLC、HPCE 2.免疫分析法：放射免疫分析法、酶免疫分析法、荧光免疫分析法等 3.生物学方法：微生物学方法用于抗生素类药物的体内分析，如生物利用度，生物等效性或临床TDM等体内样品测定 12  第一节 常用体内样品的制备与贮藏 一、生物样品的采集与贮藏 体内药物分析常用的分析品种有血液、尿液、唾液，也可用乳汁、泪液、脑脊液、胆汁等。 （一）样品的采集 1．血样 血样浓度与作用点的浓度密切相关，可以反映靶器官的浓度。 血细胞 血浆（plasma） 血小板 血清（serum） 血细胞 测定血样中平均分布于细胞内和细胞外的药浓 抗凝 自然 全血 血液 2．尿样 目的：药物剂量回收，药物清除，药物代谢和生物利用度 特点：浓度高，易于收集，体内代谢研究，应水解分 离 优点：易得，属非损伤性取样，样品量大；尿中药物浓度高，含有缀合物或代谢物，是研究代谢物结构的首选样品；蛋白含量极低，不需去蛋白处理。 缺点： 与血药浓度不相关，难以反映药物作用过程；受肾功能、pH影响；难以定时定量取样，易污染；所含成分复杂，已知其中有紫外吸收的化合物就达数十种。 3．唾液 唾液是无损伤性采样，易采集。 　　一些药物的唾液药浓（S）与血浆游离药浓(P)密切相关，因此，在TDM中可利用测定S代替P监测；唾液样品也可用于药代动力学研究。 优点：不受时间和地点的限制，可反复采集，采集时无痛苦、无感染危险；唾液成分比血液、尿液简单，提取方便，有时可直接上样测定；有些唾液中药物浓度可以反映血浆中游离型药物浓度。 16 缺点： 唾液是各腺体分泌的的混合液体，其组成发生经时变动。 S/P只有少数药物是恒定值。 蛋白结合率较高的药物，药物在唾液中的浓度低。 对有些患者（昏迷）不能采集唾液样品。 （二）样品的贮藏 1．血样（血浆、血清）及时分离→冷藏， -70℃加入稳定 剂NaF 2．尿样 ①尿中水、无机盐、尿素等细菌的生长， 4℃保存 ②加入防腐剂 a．1%甲苯 b．饱和氯仿 c．pH改变 3．唾液：同血样 18 第二节 生物样品的预处理与制备 30%以上工作和费用用在样品前处理上 二、生物样品的预处理 （一）预处理的目的 将药物从缀合物（尿）或结合物中释放出来，以测定药物的总浓度 将微量药物从复杂的介质中纯化、富集出来（分离浓缩） 防止分析仪器的污染，提高测定灵敏度和选择性等（出现浑浊和沉淀，杂质多，与试剂起反应，影响色谱柱寿命） （二）处理方法选择的一般原则 1．药物理化性质 pKa 亲脂性 挥发性 溶解度 光谱特征 稳定性 2．浓度范围 灵敏的方法 3．测定的目的 定性 定量 母体 代谢 4．生物样品的种类 5．样品处理与分析方法的选择 ①