蛇胆川贝枇杷糖浆限度检查操作方法文档.doc

蛇胆川贝枇杷限度检查操作方案 1g不得超过1000cfu。每 1ml不得超过100cfu。 霉菌和酵母菌数 每 1g或 1ml不得超过100cfu。 大肠埃希菌 每 1g或 1ml不得检出。 含蜂蜜、王浆的口服给药制剂 每10g或10ml还不得检出沙门菌。 固体、半固体或黏稠性供试品?? ????取供试品g，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至ml，用匀浆他适宜的方法，混匀，作为1：10的供试液。必要时加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀培养基的制备数量???????营养琼脂培养基： 72副皿 需1440ml 制备1500ml 20ml/副 玫瑰红钠琼脂培养基： 52副皿 需1040ml 制备1200ml 20ml/副 胆盐乳糖培养基： 需800ml 制备900ml 100ml/瓶 4-甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)： 需45ml 制备50ml 5ml/管 EMB或麦康凯琼脂培养基： 需200ml 制备300ml 25ml/副 　　 细菌、霉菌、酵母菌计数 计数培养基的适用性检查 细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查，成培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。 菌种 验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 大肠埃希菌（Escherichia coli) ［CMCC（B）44 102］ 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)［CMCC（B） 26 003］ 枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis ) ［CMCC（B） 63 501］ 白色念珠菌 (Candidaalbicans) [CMCC(F) 98 001]　 黑曲霉 (Aspergillus niger )　 [CMCC(F) 98 003]　 菌液制备 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中，培养18~24小时；接种白色念株菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，培养24~48小时。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养5~7天，加入3~5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50~100cfu的孢子悬液。 菌液制备后若在室温下放置，应在两小时内使用，若保存在2~8℃，可在二十四小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2~8℃，在验证过的储存期内使用。 适用性检查： 取大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌各50~100cfu,分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备两个培养皿，混匀，凝固，置30~35℃培养48小时，计数;取白色念珠菌，黑曲霉各50~100cfu,分别注入无菌培养皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备两个培养皿，，混匀，凝固，置23~28℃培养72小时，计数，同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 结果判定： 若被检出的培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%,且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判该培养基的适用性检查符合规定。 四、计数方法的验证 ????当建立药品的微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定。若药品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。 ????验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。 验证方法???验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。 （1）试验组?? 平皿法计数时，取试验可能用的最低稀释级供试液1ml 和50~100cfu试验菌，分别注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌