第四章定量分析方法概述.ppt

* * * 4.标准曲线法 用对照品的溶液，以吸光度与相应的浓度绘制标准曲线，再根据供试品的吸光度在标准曲线上查得其相应的浓度，并求出其含量 注：复杂，当吸光度和浓度关系不呈良好线性时用。 （二）仪器的校正和检定 b. 吸光度的准确性 a. 波长的校正 c. 杂散光的检查 （二）仪器的校正和检定 （二）仪器的校正和检定 1.波长：常用汞灯中的较强谱线、氘灯的谱线、钬玻璃尖锐吸收峰、高氯酸钬溶液 2.吸光度的准确度：重铬酸钾的硫酸溶液，规定波长处测定并计算 ，应符合下表规定 3.杂散光的检查：一定浓度的碘化钠和亚硝酸钠溶液，规定波长处测定透光率，应符合下表规定 （三）对溶剂的要求 含有杂原子的有机溶剂，使用范围不能小于截止使用波长 三、实例 （一）奥沙西泮片含量测定 20片，精密称定 研细 片粉，W 200ml量瓶 150ml甲醇 奥沙西泮溶解 定容，摇匀 过滤 5ml续滤液 100ml量瓶 乙醇 稀释，定容 UV 检测波长：229nm 吸收系数：1252 吸收系数法 三、实例 （二）呋喃唑酮含量测定 约20mg，精密称定 研细 250ml量瓶+40ml二甲基甲酰胺 溶解 定容 精密量取10ml 100ml量瓶 水 定容 对照品：呋喃唑酮 检测波长：367nm 对照品比较 第三节 色谱分析法 一、高效液相色谱法 （一）基本原理 一、高效液相色谱法 （二）应用 1.对仪器的一般要求 (1)色谱柱 反相：十八烷基硅烷键合硅胶 正相：硅胶 离子交换：离子交换填充剂 分子排阻：凝胶或高分子多孔微球 C18硅胶表面 一、高效液相色谱法 温度要求：≤40℃ 流动相pH：2~8 2.检测器 常用紫外检测器 其次有二极管阵列检测器(DAD) 荧光检测器 示差折光检测器 蒸发光散射检侧器 电化学检测器和质谱检测器等 (3)流动相 1. 甲醇-水、 乙腈-水 2.尽可能少用含有缓冲液的流动相 3.有机溶剂比例不能低于5% 药品标准中规定的色谱条件，固定相种类、流动相组成、检测器类型不得任意改变，其他均可适当改变，以适应系统适用性实验的要求。 调整流动相组分比例时，当小比例组分的百分比例X≤33%时，允许改变范围为0.7 X~1.3 X，当X＞33%时，允许改变范围为X-10% ~ X+10% 1.高效液相色谱图：信号---时间曲线 2.高效液相色谱系统适用性试验 （1）色谱柱的理论板数（n） （2）分离度（R） 除另有规定外，定量分析时分离度应大于1.5 （3）重复性（R） 连续进样，峰面积，RSD≯2.0% （4）拖尾因子（T） T：0.95～1.05 3.测定方法 （1）外标法 X：供试品 R：对照品 供试品→供试品溶液 对照品→对照品溶液 （2）内标法 ?对照品+内标 对照品峰AR 内标物峰As 6min 8min （2）内标法 ?供试品+内标 供试品峰Ax 内标物峰As 6min 8min 3.测定方法 （3）加校正因子的主成分自身对照法 （4）不加校正因子的主成分自身对照法 （5）面积归一化法 二、气相色谱法 （一）基本原理 有机溶剂的气相分离图谱 （二）应用 1.对仪器的一般要求 （1）载气源：氦气、氮气、氢气，纯度99.99%以上 （2）进样部分：采用溶液直接进样或顶空进样 （3）色谱柱：填充柱或毛细管柱 毛细管柱和填充柱 色谱柱为填充柱或毛细管柱 常用的固定液有甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等。 ※新填充柱和毛细管柱在使用前需老化以除去残留溶剂及低分子量的聚合物；色谱柱如长期未用，使用前应老化处理，使基线稳定。 （4）柱温箱：控温精度应在±1℃，且温度波动小于每小时0.1℃ （5）检测器：火焰离子化检测器（FID）、热导检测器（TCD）、氮磷检测器（NPD）、电子捕获检测器（ECD）、质谱检测器（MS）等 （6）数据处理系统 ：记录仪、积分仪以及计算机工作站等 2.系统适用性试验（和液相相同） 3.测定法 （1）内标法 （2）外标法 （3）面积归一化法 （4）标准溶液加入法 测定供试品中某个杂质或主成分含量 * * 第四章 药典中常见定量分析方法概述 药物的定量分析是指准确测定药品有效成分或指标性成分的含量。它是评价药品质量、判断药物优劣的重要手段。 对药物进行定量分析时，应按药品质量标准进行测定。 药物定量分析可选用化学分析法和仪器分析法。 化学测定法 仪器测定法 重量分析法 滴定分析法 分光光度法：紫外-可见分光光度法最常用 色谱分析法：高效液相色谱法（HPLC）