无色杆菌JA81基因组中多个假定短链脱氢酶的克隆表达及其在苯基.PDFVIP

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2018-03-29 发布于天津
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无色杆菌JA81基因组中多个假定短链脱氢酶的克隆表达及其在苯基.PDF

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无色杆菌JA81基因组中多个假定短链脱氢酶的克隆表达及其在苯基

2013-12-25 DOI: 10.3724/SP.J.1145.2013.01008 / Chin J Appl Environ Biol 2013 19 ( 6 ) : 1008-1013 应用与环境生物学报，无色杆菌JA81基因组中多个假定短链脱氢酶的克隆 * 表达及其在4-苯基-3-丁炔-2-酮还原中的应用 1, 2, 3 1, 2, 3 1, 2 1, 2** 田小亮裴小琼刘艳吴中柳 1 （中国科学院成都生物研究所，中国科学院环境与应用微生物重点实验室成都 610041） 2 （中国科学院成都生物研究所，环境微生物四川省重点实验室成都 610041） 3 （中国科学院大学北京 100049） SDRs . JA81 摘要短链脱氢酶（）是一大类可以还原羰基为手性醇的催化剂为了从无色杆菌中筛选可能的羰基还原酶，首先将它的基因组信息与COG等5个数据库比对后得到 19个假定短链脱氢酶基因 . 通过分析保守序列和进化关 16 . 4- -3- -2- 系，选择个具有活性位点保守序列的基因进行克隆，并在大肠杆菌中进行异源表达以苯基丁炔酮为底物，检测重组菌的整细胞转化活性和对映体选择性，发现多个假定短链脱氢酶具有羰基还原活性，其中SDR3067全细胞催化活性最高，产物为(S)-醇，光学纯度＞99% ee. 对 SDR3067进行纯化后发现该酶是NADPH依赖型还原酶，其最适 pH 6 25 1 g/L 10 min 24.9%. 反应为，最适温度为 ℃，当底物转化时，底物即可转化研究结果表明基因组数据挖掘是获得新型高效高选择性短链脱氢酶的有效途径 . 图7 表 1 参23 4- -3- -2- 关键词短链脱氢酶；不对称催化；无色杆菌；苯基丁炔酮 CLC Q786 + Q814 Multiple Putative Short-chain Dehydrogenases/Reductas