PCR扩增基因讲义幻灯.pptVIP

实验---- PCR扩增基因;【实验原理】 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)是一种选择性体外扩增DNA的方法,其基本原理类似于DNA的天然复制过程。 它包括: 变性(Denature) 、 退火(Anneal)和延伸(Extension)三个基本步骤。这三个基本步骤组成一轮循环,理论上每一轮循环将使目的DNA扩增一倍,这些经合成产生的DNA又可作为下一轮循环的模板,所以经25～35轮循环就可使DNA扩增达106 倍。;PCR反应包括三个基本步骤变性、退火和延伸。;Step1. 变性:加热使模板DNA在高温下(94℃)变性,双链间的氢键断裂而形成两条单链,即变性阶段。 Step2. 退火:溶液温度降至50～60℃,模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合,即退火阶段。 Step3. 延伸:溶液反应温度升至72℃,耐热DNA聚合酶以单链为模板,利用引物的3’-OH,以反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸(dNTP)为底物,按5’－3’方向复制出互补DNA,即引物的延伸阶段。 ;【实验步骤】 1. 在0.2 mL Eppendorff管内配置50 μL反应体系:;2. 按下述程序进行PCR扩增: 1) 94℃ 预变性 3 min; 2) 94℃ 变性 1 min; 3) 55℃ 退火 45 sec; 4) 72℃ 延伸 1 min; 5) 重复步骤2~4, 34次; 6) 72℃ 延伸 10 min; 7) End.;3. 琼脂糖凝胶电泳分析PCR结果 配制1％琼脂糖凝胶,取10 μL扩增产物电泳。保持电压100V。电泳结束后,在紫外灯下观察结果。 ;【思考题】 1、影响PCR反应效率的因素有哪些? 2、如何有效地提高PCR反应的效率?;，成为世界医学史上的主流。 　　可见中西医学，一个是以“功能人”为概念的独特的哲学医学理论体系，一个是以“解剖人、肉体人”为概念的新兴的现代医学科学理论体系，二者都不是以完整人为研究对象的科学，从理论讲二者都不是科学的，势必影响各自发展。事实也证明这一切，中医长期停滞不前、疗效也不确实。西医尽管发展到目前的基因分子层次，但疾病发病率居高不下，对绝大部分疾病发病原因认识不清、⒉』砼幻靼祝瘟剖艿街圃迹谛⌒SARS、禽流感面前竟束手无策，在糖尿病、癌症、心脑血管疾病、尿毒症等相当多疾病面前更是不得不求助或借助中医治疗。一个是疗效不确实，一个是有些甚至相当多疾病无法治疗，这就是中西医学结合的缘由。然而，由于二者是两套理论、两股道上跑的车，风马牛不相及，从理论上讲就没薪岷系目赡埽皇切问缴系娜诤前存在于中西医学甚至人文社会科学史上一切疑难模糊问题，成为阻碍医学科学前进的羁绊。的确，要解决目前存在于中西医学甚至人文社会科学上一切赡涯：侍猓匀灰淹耆隽酥形饕窖婕暗姆冻耄颐潜匦胩鲋形饕窖У睦砺劭蚣埽⑵鹨桓鲂碌囊窖Ю砺厶逑 - 东方医学和西方医学（即西医）的融合形成现代系统医学。该体系所涉及的一切问题不管从广度上，还是从深度上，都应该远远超过现有的中西医学理论，并将现有中西医学理论纳入自己的理论框架范围之内。为了肩负起这一历史使命，原创人生、医学理论体系——灵魂医学 soul medicine应运而生，她不但从宏观上或战略上圆满解释并解决了存在于人类医学及人文社会科学史上的一切疑难模糊问题，而且还能够使人们得以启迪人生，不得不重新认识人类自身、不得不重新认识人类赖以生存的这个多维世界对象的医学科学，故不能解现今医学分为传统医学、基于“生物-医学模式”近代发展起来的西医，20世纪西医又发展到“社会-心理-生物医学”或综合医学模式，后基因组时代系统生物学的兴起，形成了系统医学在全球的迅速发展，成为继传统医学、西医学之后中、西医学汇通的未来医学。当代中国医学类专业比较优秀的学校有北京大学、华中科技大学、郑州大学等学校。 　　中医即中国传统医药学，是形成于数千年前的中国，是建立在人们与疾病长期斗争的经验总结。习樟恕９食鱿治饕蕉灾瘟撇涣说募膊≈缓们笾幸剑幸皆蛲捎梦饕秸锒现幸街瘟疲约爸形髦瘟品ㄒ豢橛玫木置妗 　　至于循证医学、比较医学、后现代医学、行为医学等所谓“医学”，都称不上一门独立的医学科学，关于这一点在灵魂医学有关章节中将有相关点评。 　　总之，目前以中西医学为主的世界各种医学科学都存在不完整性的瑕疵，即都是以不完整的人为研究及阴阳五行、八纲脏腑辨证基础上，运用朴素辩证法及思辨推理方法，认识机体、自然、疾病三者关系，发展起来的一门以“功能人”包括功能脏器为概念的独特的医学哲学理论体系。在治疗上，除了药物外，还有针灸、推拿气功、耳针等特殊疗法，它是世界传统医学中最完善的一种医学理论体系。