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Chapter 10电泳技术Electrophoresis 本章主要知识点 电泳的概念、动电现象 电泳的基本原理及动电过程 电泳技术的分类 影响电泳迁移率的因素有哪些？ 常用的凝胶电泳技术有哪些？ 电泳装置的基本组成 聚丙稀酰胺凝胶电泳的一般过程 SDS电泳的基本原理及过程 琼脂糖电泳的特点及其应用 等电聚焦电泳的基本原理 双相电泳的概念及其特点 毛细管电泳的基本原理 10.1 电泳发展简史 1740年印度科学家G．M．Bose首先发现电泳现象。 1807年俄国物理学家F.F.Reuss首次发现电泳行为和电渗行为。 1909年Michaelis首次将胶体离子在电场中的移动称为电泳electrophoresis，简称EP 。 1937年瑞典的Tiselius创造了Tiselius电泳仪，建立了研究蛋白质的移动界面电泳方法。  1948年Wieland和Fischer发展了以滤纸作为支持介质的电泳方法，对氨基酸的分离进行过研究。  电泳发展简史 1937年瑞典科学家Tiselius建立“移界电泳法(moving boundary EP)”，成功地将血清蛋白质分成清蛋白、α1、α2、β和γ球蛋白5个主要成分。 10.1 电泳发展简史 1950年Durrum用纸电泳进行了各种蛋白质的分离以后，开创了利用各种固体物质（如各种滤纸、醋酸纤维素薄膜、琼脂凝胶、淀粉凝胶等）作为支持介质的区带电泳方法。  1959年Raymond和Weintraub利用人工合成的凝胶作为支持介质，创建了聚丙烯酰胺凝胶电泳，在此基础上发展了SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦电泳、双向电泳和印迹转移电泳等技术。开创了近代电泳的新时代。 80年代发展的新的毛细管电泳技术，是化学和生化分析鉴定技术的重要新发展。 电泳概念 Arne Tiselius——物理化学家、诺贝尔奖金获得者 定义——荷电的胶体粒子在电场中的移动； 电泳决定因素 表面电势和双电层起着决定性的作用。 斯特恩双电层的形成 胶体颗粒通过选择性吸附、化学反应或电离等过程得到一个带电表面，表面电荷将影响附近的离子的分布导致分散介质中的反离子紧密的贴在表面而同离子受到排斥，形成双电层。 双电层的结构 结构 紧密层（吸附层）+扩散层 离子分布特点 （1）反离子的数目随离开颗粒表面的距离增加而减少。 （2）同离子的数目随离开颗粒表面的距离增加而增多。 表面电位 Zeta电位是指带电的胶粒与介质作相对运动时的滑移面（剪切面）与介质之间的电势差，又称为表面电位。 Zeta电位的高低是反离子在吸附层和扩散层中占有比例的多少 动电现象 (electrokinetic phenomenon) 概念 表面带电的胶粒与周围介质（固-液或液-液界面）在外加电场作用下作相对运动而产生的电场现象，主要类型有电泳、电渗、流动电位与沉降电位等四种动电现象。 动电现象之一电渗 当带电表面固定，分散介质（液体）可以移动时即为“电渗”。 动电现象之二流动电位 流动电位，又称流动电势(Streaming Potential)：无外加电时，在外力作用下，液体介质相对于静止的胶粒表面作定向流动时所形成的电势差（属电渗的逆过程）。 动电现象之三电泳 当电场沿切线方向作用于带电表面时，双电层的两部分分别受到相反方向的作用力，胶粒在分散介质中朝着某一电极迁移的现象 ，称为“电泳”， 动电现象之四沉降电位 带电表面与扩散层作相对运动时会产生电场，如果胶粒相对于静止液体运动，所产生的电位称为“沉降电位”； 电泳的理论基础 蛋白质、核酸、多糖等的净电荷 取决于介质的H+浓度或与其它大分子的相互作用。 带电粒子在电场中的迁移方式 依据分子尺寸大小和形状、分子所带电荷或分子的生物学与化学特性。 电泳的理论基础 带电颗粒在电场中泳动的速度或单位电位梯度（E）的作用下，单位时间（t）内质点所移动的距离称迁移率或泳动度（U） U=v/E=(d/l)/(V/l)=dl/Vt 式中，U(也可以用m表示)为泳动度；v为颗粒泳动速度(cm/s)；E为电场强度(V/cm)；l为支持物的有效长度(cm)；V为实际电压(V)；t为通电时间(s或min)。 电泳的理论基础 球形分子在电场中所受的力(F)为： F=EQ 式中，E为电场强度，即每厘米支持物的电位降，Q为被分离物所带净电荷。 电泳的理论基础 根据Stoke定律，一球形分子在液体中泳动所受的阻力(摩擦力)F′为： F′=6πrηv 式中，η为介质粘度，r为分子半径，v为分子移动速度。