20章基因工程.pptVIP

第 二十 章 基 因 工 程 三、转基因动物和植物 1994年能比普通西红柿保鲜时间更长的转基因西红柿投放市场 1996年转基因玉米、转基因大豆相继投入商品生产 到1996年全世界已有250万公顷土地种植转基因植物 （一）疾病基因的发现 （二）发展生物制品 1、人类基因组计划 human genome project，HGP 2、脆性X综合症 1、蛋白质 EPO、生长因子、胰岛素、干扰素、乙肝疫苗 2、转基因食品 3、生物克隆 四、基因诊断与基因治疗 （四）基因治疗 gene therapy （五）遗传病的预防 （三）DNA诊断 DNA diagnostics 1、基因芯片 2、法医鉴定 3、亲子鉴定 转基因 1、产前检查 2、疾病预测 复习题： 1、名词：基因重组、基因工程、基因载体（克隆载体、 表达载体）、限制性核酸内切酶、质粒、 2、限制性内切酶切割方式和切口？用同一个酶切目的 基因和载体，重组实验得到几种结果？双酶切呢？ 3、基因工程的基本过程？ 4、构建重组DNA质粒时，插入抗生素标志或遗传标志补救 的目的是什么？机制如何？ 5、克隆载体选择的标准？ 练习题 1、通过自动获取或人为提供外源DNA使受体细胞获得新的 遗传表型，称为 A、转导 B、转化 C、转染 D、转座 E、接合 2、 限制性核酸内切酶切割DNA后产生 A、5’磷酸基和3’羟基基团的末端 B、5’羟基基团和3’磷酸基的末端 C、5’磷酸基和3’磷酸基的末端 D、5’羟基基团和3’羟基基团的末端 E、以上都不是 3、在下述双链DNA序列中不属于完全回文结构的是 A、AGAATTCA B、TGAATTCA C、GGAATTCC D、CGTTAACG E、AGATATCT 4、不能用作克隆载体的DNA是 A、质粒DNA B、噬菌体DNA C、细菌基因组DNA D、腺病毒DNA E、逆转录病毒DNA 5、下列关于限制性内切酶的叙述哪一项是错误的？ （ ）A．它能识别DNA特定的碱基顺序，并在特定的位点切断DNAB．切割点附近的碱基顺序一般呈回文结构C．它能专一降解经甲基化修饰的DNAD．是重组DNA的重要工具酶E．主要从细菌中获得 6、从带有遗传信息的mRNA构建DNA重组体，要利用（ ）A．质粒B．限制性核酸内切酶C．DNA连接酶D．反转录酶 7、基因工程的主要内容包括 ( )A．载体和目的基因的分离B．限制性内切酶的切割，并把载体和目的基因合成重组C．DNA重组体的转化表达D．DNA重组体的扩增、筛选与鉴定； 1. 对目的基因DNA和载体DNA进行酶切修饰 目的DNA 限制性核酸内切酶 质粒DNA 基因克隆的载体 粘性末端 平末端 DNA经过酶切后产生两种形式的末端 酶切后的质粒示意图 三、目的基因与克隆载体的连接 酶切后的质粒DNA 简单表示为 重组质粒 同种限制酶酶切目的基因和载体，产生相互对应的粘性末端，退火后以DNA连接酶共价互补连接。 2. 目的基因连接到载体的过程 粘性末端 同一限制酶切位点连接 不同限制内切酶位点连接 平端连接 Bam HⅠ切割反应 GGATCC CCTAGG T4 DNA连接酶 15oC GATCC G G CCTAG + 载体DNA用 Bam HⅠ切割 目的基因用Bam HⅠ切割 重组体 载体自连 目的基因自连 同一限制酶切位点连接 不同限制酶切位点的连接 Eco RⅠ切割位点 Bg lⅡ切割位点 + EcoRⅠ+ Bg lⅡ 双酶切 Eco RⅠ+ Bg lⅡ 双酶切 T4 DNA连接酶 15oC 重组体 目的基因定向插入载体，特异性和重组效率提高。 目的基因 载体 限制性内切酶 限制性内切酶 T4 DNA连接酶 15oC 重组体 载体自连 目的基因 自连 平端连接 相同酶酶切产物 同聚物加尾连接 在末端转移酶(terminal transferase)的作用下，在DNA片段末端加上同聚物序列、制造出粘性末端，再进行粘端连接。 人工接头(linker)连接 由平端加上新的酶切位点，再用限制酶切除产生粘性末端，而进行粘端连接。 受体菌条件： ● 安全宿主菌 ● 限制酶缺陷型（R-）和重组缺陷型Rec- ● 细胞处于感受态(competence) 四、重组DNA的导入 导入方式 1、重组DNA导入大肠杆菌---转化