中国药科大学中药分析技术课件-中药代谢动力学.pptVIP

生物样品前处理方法 样品均匀化 对于生物样品，应在测定前混合均匀，以免造成测定误差。可置涡流混合器上混匀，血浆样品往复振摇亦可达到均匀化的目的。 对含有不溶性组分的样品(例如组织和粪便)，须将样品进行匀浆处理，以保证样品的均匀性。 同时还应注意取样的代表性问题。  2. 去蛋白处理 生物样品如血浆、血清等含有大量的蛋白质，它们能结合药物，因此对于某些药物的测定，必须先将与蛋白结合的药物游离之后再作进一步处理。 通常去蛋白过程是将蛋白质变性处理后，把与蛋白结合的药物解离出来，离心分离以除去蛋白。 ※加入适当的沉淀剂或变性剂，使蛋白质脱水而沉淀(如有机溶剂、中性盐)，甲醇、乙腈、丙酮和乙醇是沉淀蛋白常用的有机溶剂 ※有的是由于蛋白质形成不溶性盐而析出(如高氯酸) 中性盐可用氯化铵等。 ※无机盐沉淀蛋白是可逆的，即将蛋白稀释后仍具有生理活性，而有机溶剂和酸类沉淀的蛋白是不可逆的。 ※也可用透析法与超滤法除去样品中蛋白。 ※是否会导致生物样品中的药物发生分解或影响药物的提取。 3. 被测组分的提取 生物样品中被测组分一般需提取后才能进行色谱分析，这一步骤包含了样品的净化与浓缩。 液液萃取 一般弱酸性药物可加入一定量的酸，弱碱性药物可加入一定量的碱，使药物以分子状态存在，有利于有机溶剂的提取效果； 有时加入一些强离子的无机盐(如氯化钠)， 利用盐析作用，能促进组分进入有机相。 在液质联用中，必须使用可挥发性的酸和碱，甲酸、乙酸、氨水等。通过选择不同的有机溶剂可提高选择性。一般可选用乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷、氯仿、正己烷、甲基叔丁基醚、甲醇、乙腈等有机溶剂及其不同比例的混合物进行提取。 两性药物或水溶性很强的药物通常可用离子对萃取法。针对呈解离状态的药物，可以加入反离子来形成离子对络合物，再用有机溶剂萃取出来。一般碱性药物用十二烷基磺酸类作为反离子；酸性药物可用烷基季铵类化合物作为反离子，如四丁基铵等。形成离子对后可用相应有机溶剂提取。 固相分离 固相分离又称为固相提取柱法，其常用的柱填料有吸附剂、高分子大孔树脂、离子交换树脂、键合硅胶等。 On-line identi?cation of the constituents of Buyang Huanwu decoction in pig serum using combined HPLC–DAD–MS techniques Journal of Chromatography B, 831 (2006) 288–302 补阳还五汤：补气活血通络，中风，心脑血管疾病。 黄芪：黄酮、皂苷； 赤芍：芍药苷； 当归：挥发油类成分； 川芎：生物碱； 桃仁：苦杏仁苷、甾体皂苷； 红花：红花苷、黄酮； 地龙：蛋白质 红花 川芎 黄芪 Screening and identi?cation of potential bioactive components in a combined prescription of Danggui Buxue decoction using cell extraction coupled with high performance liquid chromatography Biomed. Chromatogr. 22: 157–163 (2008) 当归补血汤： 补气补血 当归 黄芪 川芎 提取物 hepatic cell line HL-7702 cell, macrophage RAW 264.7 Caco-2 cell 共孵 离心得到细胞； 清洗细胞壁 破碎细胞；得到细胞内提取液 HPLC-DAD HPLC-ELSD HPLC-TOF-MS 黄酮类酚酸 皂苷 结构确认 Determination of themain bioactivemetabolites of Radix Salviamiltiorrhizae in Compound Danshen Dripping Pills and the tissue distribution of Danshensu in rabbit by SPE-HPLC-MSn J. Sep. Sci. 2007, 30, 851 – 857 the concentration of DSS was Cheart Cliver Ckidney Clung These results were consistent with a good cardiovascular curative effect of the pills Pharmacokinetics and bioavailability