基因工程专题案例实例.ppt

基因工程专题 基因工程中涉及的现代生物学技术介绍 基因工程的操作过程 1）工具酶的介绍 2）载体的选择 3）重组DNA的筛选 识别双链DNA分子上特定的核苷酸序列， （4-6个碱基对，且具有回文结构）并有相应的酶切位点 3）结果： 形成黏性末端或平末端 1、限制性核酸内切酶 1）来源及作用： 主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶, 旨在将DNA片段化。 2）特点： 酶切产物片段数量计算： 1、线性DNA分子： n+1 n 2、环状DNA分子： 如含n个酶切位点，则完全酶切后得 个 DNA片段； 如含n个酶切位点，则完全酶切后得 个DNA片段； 具平末端片段间的连接： 目的基因 限制酶A 载体 限制酶A 重组体 限制酶B 思考： 1、用限制酶A和限制酶B酶切重组体，可得几个DNA片段？ 思考： 2、用DNA连接酶可得几种重组体？ DNA连接酶 GTCGAC CAGCTG HindⅡ: GTC CAG GAC CTG + CCC GGG GGG CCC + CCCGGG GGGCCC SmaⅠ GTCGGG CAGCCC 具平末端的片段的连接 特点： 1、特异性不强： 　无论限制酶是否相同，只要产生的都是平末　　端，则可进行连接； 2、如用相同的限制酶酶切后，重组DNA分子上仍保留有原有限制酶的识别序列；如用不同的限制酶酶切后，重组DNA分子上原有限制酶的识别序列丢失，但可能产生新的限制酶的识别序列。 具黏性末端片段的连接： 特点：特异性强 　用相同的限制性内切酶，可产生相同的黏性末端，方能进行DNA的连接。 １、不同的限制酶如产生相同的黏性末端，　　　　 　　则可进行DNA连接。 ２、重组DNA上的酶切位点可能改变。 Bam HⅠ Bg lⅡ GGATCC CCTAGG AGATCT TCTAGA G CCTAG GATCC G + + A TCTAG GATCT A GGATCT CCTAGA 2 1 1、08江苏生物32题：（5） ①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到_________种DNA片断。 ②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到_________种DNA片断。 单酶切： 具黏性末端的片段间的连接 双酶切： 具黏性末端的片段间的连接 单酶切： 用同种限制酶酶切DNA，可产生 相同的黏性末端。 目的基因 限制酶A 载体 限制酶A DNA连接酶 重组体 载体自 身环化 目的基因 自身环化 具黏性末端的片段间的连接 双酶切法： 用两种不同的限制酶酶切DNA，由于两端的黏性末端不一样，避免了DNA片段的自身环化。 优势： 形成的重组质粒只有一种，避免了筛选。 5、（普陀）在构建含目的基因的重组质粒A时，如果使用EcoRⅠ进行酶切，则含目的基因的外源DNA 片段和质粒在DNA连接酶的作用下，至少可形成 种环状产物。 3 为防止含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用___________ (限制）酶进行切割。 BamHⅠ 和HindⅢ 载体必须具备的条件 能够在宿主细胞中自我复制并稳定地保存。 具有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 具有某些标记基因，便于进行筛选。 必需是安全的，不会对受体细胞有害。 大小应适合，便于提取和操作。 * * 左下角处有超级链接到配伍末端