基因表达载体的组成.ppt

* 一、DNA重组技术的基本工具 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 载体 常用类型 作用特点 （条件） 作用部位 作用 切割目的基因和载体 拼接DNA片段 形成重组DNA 携带目的基因进入受体细胞 两个核苷酸的脱氧核糖和磷酸 之间的磷酸二酯键 能识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开 1、能在宿主细胞内稳定存在并大量复制 2、有一个或多个限制酶切个位点（最好是对多种限制酶有单一切点） 3、有标记基因 4、对受体细胞无害 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 2、基因表达载体的构建 （1）基因表达载体的组成 （2）构建基因表达载体的目的 （3）基因表达载体的构建方法 24.如图为某种质粒表达载体简图， 小箭头所指分别为限制性内切酶 EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR 为青霉素抗性基因，tetR为四环 素抗性基因，P为启动子，T为终 止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。据图回答： （1）将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有 、 、 三种。 目的基因—载体连接物 载体—载体连接物 目的基因—目的基因连接物 24.如图为某种质粒表达载体简图， 小箭头所指分别为限制性内切酶 EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR 为青霉素抗性基因，tetR为四环 素抗性基因，P为启动子，T为终 止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。据图回答： （2）用上述三种连接物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是 ；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是 。 目的基因—载体连接物 载体—载体连接物 载体—载体连接物 24