流式细胞分析仪技术.ppt

What is flow cytometer Comparisons Flow cytometer is a special microscope Specific functions （1）Multiple characterizations 　 （2）High purity: purity：99%； Basic Principles Data analysis Non-fluorescent signal Fluorescent signals Cell sorting 流式細胞儀的測量對象 大小 懸浮在溶液中的相互離散顆粒。 大小範圍：0.2uM-300uM。 對象類型 细胞類型： （1）高等真核细胞； （2）酵母； （3）细菌； （4）多細胞的聚集體，如胰島素表現細胞等。 非生命顆粒： 細胞核、染色體、和其它胞器以及顆粒等。 流式细胞儀能够檢测的细胞屬性和成份舉例 1）不需染色： 大小，細胞質顆粒度，细胞自發螢光，色素，细胞精確計數。 2）需染色或標記： 细胞成分： 细胞膜： 流動性，通透性，膜電位 细胞内離子：H+（可檢測PH值），Na+，K+，Ca2+（结合的 和自由的）。 核酸： DNA含量，DNA成分，DNA合成，RNA，染色 體結構等 總蛋白質 蛋白質分子相相互作用 抗原 细胞骨架成分 受體 Terminal deoxynucleotide transferase dUTP Nick End Labeling (TUNEL) TUNEL Staining Phosphatidylserine ExposureAnnexin V Staining * * 流式細胞分析儀技術 Flow cytometer analysis and applications on apoptosis 分細所 張新侯 BD FACSVantage BD-Calibur Flow cytometer microscope Flowing cells Static cells In great number Small amount Subpopulation analysis Cellular signaling 　（3）High throughput: 　 150，000 cells/ sec 原理： 流體動力學聚焦 Laser beam mirrors 1 2 3 Filters PMT laser Cell lance Forward scatter Side scatter or fluorescence Light path FSC SSC FL1 FL2 FL3 log linear linear linear log Light signals Electric signals Data recording 颗粒度 细胞大小 散射光信號區分裂解後的周邊血球细胞群 螢光染料被激發而發射的光信號。 定量染色 螢光信號大小 被標記组分含量的定量 多螢光標記胞内多種组分，實現多參數测量 PI＋Annexin－V细胞凋亡檢測 DNA含量-PI Annexin-V laser 功能屬性： 酶活性 细胞凋亡 细胞壞死 细胞活性 氫硫基 凝血素结合位置 藥物動力学 …………………….. 經驗談： 凡细胞内能進行螢光標記的成分或變化，都可用流式细胞儀進行檢測。 G1 S phase G2 M G1 1 2 1 DNA含量 DNA 含量 细胞周期 G0/1 G2/M S 细胞數 细胞周期分析 Hoech