人教版高中生物选修一3.1菊花的组织培养课件7共48张PPT.ppt

1、制备MS固体培养基 MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4℃保存配制好的培养基母液来制备。 1）配制各种母液 ①无机物：大量元素浓缩10倍， 微量元素浓缩100倍， 常温保存 ②有机物：激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液 ③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量 2）配制培养基 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml。 ① 配制培养基 ② 调PH ③ 分装 注意：由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素。 琼脂融化 蔗糖 无机物、有机物的母液 蒸馏水 + + + 3）灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌。 1）选材：选取菊花茎段时，要取生长旺盛的嫩枝 2、外植体消毒 2）消毒： ①流水冲洗 ②酒精处理 ③消毒液处理 流水冲洗 + 洗衣粉刷洗 流水冲洗20min左右 + 无菌吸水纸吸干 70%酒精中2~3次，6~7s 无菌水清洗 + + 无菌吸水纸吸干 0.1%氯化汞中1~2min 无菌水清洗至少3次 + + 3、接种 空气消毒——70％的酒精喷雾 工作台——70％的酒精擦拭 1）接种室消毒 2）无菌操作要求 ①所有接种操作都必须在酒精灯火焰旁进行。 ②每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌。 3）材料的切取和接种 将装有培养基的锥形瓶整齐地排列在酒精灯左侧。将消过毒的菊花茎段在无菌培养皿中切成小段（长约0.5-1cm）。左手持锥形瓶，右手拉开捆扎锥形瓶的绳子，并将封口膜攥在右手手心，以避免封口膜接触瓶口的一面被污染。左手持瓶，使瓶口旋转通过火焰，右手用镊子夹取菊花茎段，放入培养基中。插入时应注意不要倒插。每瓶接种6－8块外植体。接种后，将封口膜重新扎好。 4）接种注意事项 ①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种。 ②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－4块，菊的茎或叶6－8块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件。 ③插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分 思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？ 每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个未接种的装有培养基的锥形瓶，与实验组一同培养，以检测培养基是否制作合格，有无被杂菌污染。 4、培养 接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期间应定期消毒。培养温度控制在18-22℃，并且每日用日光灯光照12h。 5、移栽 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日。然后用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间，等幼苗长壮后，移栽到土壤中。 幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花。 6、栽培 1、外植体带菌 2、培养基及接种器具灭菌不彻底 3、接种操作时带入 4、环境不清洁 思考：在整个操作过程中都要确保无菌，想一想哪些因素可能带入杂菌？ 1.接种室、工作台 2.培养基的灭菌 3.外植体的消毒 4.接种的无菌操作 5.无菌箱中的培养 6.移栽到消过毒的环境中生存一段时间。 思考：在整个操作过程中，应如何实现无菌环境呢？ ——高压蒸汽灭菌 ——酒精、氯化汞 ——酒精、酒精灯灼烧 ——酒精 课题目标： 1、植物组织培养的原理 2、植物组织培养的基本过程和必要条件 3、影响植物组织培养的因素 4、具体的实验操作过程及注意事项 5、结果分析与评价 （一）对接种操作中污染情况的分析 （二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化 （三）是否进行了统计、对照与记录 （四）生根苗的移栽是否合格 五、结果分析与评价 思考：下面的示意图中还有什么地方不够完善的？ 　　没有进行灭菌处理，试管也没有做密封等。 六、课题延伸 一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养。 实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季 1、植物组织培养依据的原理、培养过程的顺序及诱导的植物激素分别是（??? ） ①细胞的全能性? ②离体植物器官，组织或细胞? ③根，芽④生长素和细胞分裂素 ⑤生长素和乙烯 ⑥愈伤组织⑦再分化 ⑧脱分化 ⑨植物体 A．①、②⑧⑥⑦③⑨、④ ? B．①、②⑦⑥⑧③⑨、⑤ C．①、⑥②⑨⑧③⑦、⑤? D．①、②⑨⑧⑥⑦③、④ 2、植物材料的选择直接关系到实验的成败,菊花选材一般选择（　　） A.未开花植株的茎上部新萌生的侧枝 B.开花植株的茎上部枝条 C.开花植株上