分子嵌合mhc-ⅰ基因对小鼠dc反应的研究-天津医药.pdf

378 Tianjin Med J,Apr2012, Vol 40 No 4 doi:10.3969/j.issn.0253-9896.2012.04.023 分子嵌合MHC-Ⅰ基因对小鼠DC反应的研究 △ 闫永嘉 付蔚华 高 莹 朱理玮 摘要 目的：构建分子嵌合主要组织相容性复合体（MHC）-Ⅰ基因小鼠骨髓造血干细胞，并探讨其诱导脾脏T细 胞对异基因小鼠树突状细胞（DC）反应的机制。方法：密度梯度法分离培养BALB/c小鼠骨髓造血干细胞。构建携带 C57BL/6小鼠MHC-Ⅰ基因慢病毒载体（病毒感染组），携带无意义基因慢病毒载体（阴性对照组）。分别感染BALB/c 小鼠骨髓造血干细胞，构建分子嵌合细胞。分别取病毒感染组、阴性对照组及未加入病毒的空白对照组造血干细胞 输注BALB/c小鼠后7d，获取脾脏T淋巴细胞，分别与C57BL/6小鼠DC进行混合淋巴细胞培养，测定刺激指数。结 果：成功体外分选及培养BALB/c小鼠骨髓造血干细胞。病毒感染组C57BL/6小鼠MHC-Ⅰ蛋白表达率可达98.17%。 单向混合淋巴细胞培养结果显示，C57BL/6小鼠DC对输注病毒感染组细胞后BALB/c小鼠脾脏T细胞刺激指数明显 降低（P 0.01）。结论：输注分子嵌合MHC-Ⅰ基因造血干细胞后，小鼠脾脏T细胞对异基因小鼠DC反应明显减低。 关键词 骨髓祖代细胞 慢病毒属 T淋巴细胞 免疫耐受 树突细胞 MHC-Ⅰ基因 小鼠，近交BALBC 小鼠，近交C57BL 疾病模型，动物 The Research on Chimeric MHC-I Gene Responsing to Allogeneic Dendritic Cells YANYongjia,FUWeihua,GAOYing,ZHULiwei Department of General Surgery, The General Hospital of Tianjin Medical University, Tianjin 300052, China Abstract Objective: Toconstructthemousebonemarrowhematopoieticstemcells(HSCs)withchimericMHC-Ⅰ gene,andtoexplorethemechanismofitinducingTlymphocyteresponsetoallogeneicdendriticcells(DC). Methods: The mouse(BALB/c)bonemarrowHSCswerecollectedwiththelymphocyteseparationmediumbydensitygradientseparation. TheidentifiedHSCswereinfectedbytheconstructedlentiviralvectors.Afterinfection,themolecularchimerismwassuccess⁃ fullyconstructed,calledinfectedgroup.TheHSCinfectedbylentiviralvectorswithoutH2-K1was countedasnoninfected group.TheHSCwascountedasblankcontrolgroup.TheabilityofmolecularchimerisminTlymphocyteresponsetoallogene⁃ icdendriticcellswasobservedthroughmixedlymphocyteculture(MLC). Results: TheBALB/cmousebonemarrowHSCs weresuccessfullyseparatedandcultured.FlowcytometryanalysisindicatedthatMHC-Ⅰproteinexpressionwas