生物化学-蛋白质化学方法技巧.ppt

生物化学; 第四章 蛋白质化学;*;*;*;*;*;4.2 氨基酸; 氨基酸的结构与分类;氨基酸的结构与分类; ; ; ; ; 氨基酸的结构与分类;;;非编码氨基酸;非蛋白质氨基酸;氨基酸的理化性质;氨基酸的理化性质;氨基酸的理化性质;氨基酸的理化性质;氨基酸的理化性质;1. 氨基酸的酸碱性的判断;3、紫外吸收：;氨基酸的理化性质;氨基酸的理化性质;氨基酸的理化性质;氨基酸的理化性质;有机物中的胺根在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，硝化生成（NH4）2SO4 　　反应式为： 　　CuSO4 +2NH2—+H2S04+2H+＝(NH4)2S04 　　2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，收集于H3BO3 溶液中 　　反应式为:  　　(NH4)2SO4+2NaOH＝2NH3+2H2O+Na2SO4 　　2NH3+4H3BO3＝(NH4)2B4O7+5H2O 　　3. 用已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量 　　反应式为：  　　(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O＝(NH4)2SO4+4H3BO3 　　(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3 ;H2N—CH—COOH +;成肽反应; ; ;1．纸层析法;4.3 肽;肽的基本概念;肽命名;命名举例;谷胱甘肽;肽类应用研究和发展前景;激素; 抗生素;活性肽;肽的应用及发展;4、蛋白质的基本结构形式： 多肽链 (…NHCHCONHCHCO…) 多肽链的方向性：从N末端指向C末端。;4.4 蛋白质分子的一级结构及其测定;蛋白质分子的一级结构测定方法;;;;;;;;;;;;;;4.6、蛋白质的二级结构;肽链构象; （二）二级结构的基本构象;α螺旋主要的结构特点;1、α-螺旋(α-helix) 右手螺旋：3.6个AA/圈，螺距0.54nm； 氢键维系：链内氢键（AA1…AA4），平行长轴； 侧链伸出螺旋;β折叠结构;β折叠结构;2、β-折叠(β-pleated sheet) 多肽链充分伸展，肽平面折叠成锯齿状； 侧链交错位于锯齿状结构的上下方； 氢键维系：氢键的方向垂直长轴； 可有顺平行片层和反平行片层结构。;三、结构域;结构域;结构域;四、蛋白质的三级结构;肌红蛋白的三级结构;五、三级结构的特点:;五、蛋白质的四级结构;六、维持蛋白质分子构象的化学键;;4.6 蛋白质结构与功能的关系;核糖核酸酶的变性与复性;核糖核酸酶的变性与复性;镰刀型红细胞贫血的分子基础;镰刀型红细胞贫血的分子基础;肌红蛋白与血红蛋白;肌红蛋白与血红蛋白的氧合曲线;别构效应（别位效应、变位效应，allosteric effect）：蛋白质分子的特定部位（调节部位）与小分子化合物（效应物）结合后，引起空间构象发生改变，从而促使生物学活性变化的现象称为变构效应。包括正协同、负协同效应 【经典举例】血红蛋白（Hb）：由α2β2四聚体组成，每个亚基含有1个血红素辅基；Hb的氧解离曲线呈“S”型。 多种空间构象，多种活性状态;4、蛋白构象疾病：疯牛病，由于朊病毒蛋白（PrP）构象改变导致蛋白质聚集，形成抗蛋白水解酶的淀粉样纤维沉淀。;胶体性质 1、透析 2、盐析 3、凝胶过滤;电泳;电泳;（1）变性：在某些理化因素作用下，蛋白质的空间结构被破坏，从而导致其理化性质改变、生物活性丧失的现象称为变性。变性不涉及一级结构的变化。 理化性质的变化：紫外吸收、化学活性及粘度上升，易被蛋白酶水解；溶解度下降、结晶能力丧失。;（2）复性 （3）应用 ①利用变性： 酒精消毒 高压灭菌 ②防止变性：低温保存生物制品 ③取代变性：乳品解毒(用于急救重金属中毒);蛋白质的性质及纯化;凝胶过滤;酸碱性质 1、等电点沉淀 2、离子交换层析 3、电泳 ;类 别