第十章 吸光光度法培训讲解.pptVIP

分析化学教研室 吸光光度法误差主要有：一是偏离朗伯-比尔定律；二是吸光度测量引起的误差。 10.4.2 对朗伯-比尔定律的偏离 在吸光光度分析中，经常出现标准曲线不呈直线的情况，特别是当吸光物质浓度较高时，明显地看到通过原点向浓度轴弯曲的现象。 1.非单色光引起的偏离 严格说，朗伯-比尔定律只适用于单色光，但由于单色器色散能力的限制和出口狭缝需要保持一定的宽度，所以目前各种分光光度计得到的入射光实际上都是具有某一波段的复合光。由于物质对不同波长光的吸收程度的不同，因而导致对朗伯-比尔定律的偏离。 措施：a. 使用好的单色器；b. 应将入射光波长选择在被测物质的最大吸收处。 2.介质不均匀引起的偏离 被测溶液不均匀，会使一部分入射光因散射而损失，使透射比减少，因而实测吸光度增加，使标准曲线向吸光度轴弯曲。 3.由于溶液本身的化学反应引起的偏离 溶液对光的吸收程度决定于吸光物质的性质和数目，溶液中的吸光物质常因解离、缔合、形成新化合物或互变异构体等化学变化而改变其浓度，因而导致偏离朗伯-比尔定律。 10.4.3 吸光度测量的误差 测量结果的精度常用浓度相对误差表示，即： 据朗伯-比尔定律：A= ?bc 两边微分： 对给定的分光光度计来说，透光率读数误差dT是一个常数，约为0.01～0.002，但同样大小的dT在不同透光率时，所引起的浓度相对误差是不一样的。 透光率在什么范围内具有较小的浓度测量误差？ A = -lgT = -0.434lnT 对此式微分： 可见，浓度测量的误差不仅与仪器的读数误差dT有关，还与其本身的透光率有关。 实测表明：只有使待测溶液的透射比T在15%～65%之间，或吸光度A在0.2～0.8之间，才能保证测量的相对误差较小。 * * 第10章 吸光光度法 Chapter 10 Absorptiometry 吸光光度法又称为分光光度法（Spectrophotometry）是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法，包括比色法、可见及紫外吸光光度法及红外光谱法等。本章重点讨论可见光区的吸光光度法。 10.1 物质对光的选择性吸收和光吸收的基本定律 10.1.1 物质对光的选择性吸收 光是一种电磁波，具有波粒二象性。可见光的波长范围为400～750 nm。红、橙、黄、绿、青、蓝、紫。 理论上将具有同波长的光称为单色光，包含不同波长的光称为复合光。 互补光：若两种特定颜色的光按一定比例混合可以得到白光，则这两种特定颜色的光称为互补光。 物质对光的选择性吸收： 光的吸收是物质与光相互作用的一种形式，吸光物质对可见光的吸收必须符合普郎克条件：只有当入射光能量与物质分子能级间的能量差?E相等时，才会被吸收，即 当用频率为?电磁辐射照射分子，若电磁辐射的能量h?恰好等于该分子的较高能级与较低能级能量差?E时，在微观上出现分子由较低能级跃迁到较高能级；在宏观上则体现在透射光的强度变弱。 吸收光谱有原子吸收光谱和分子吸收光谱。 原子吸收光谱是由原子外层电子选择性地吸收某些波长的电磁波而引起的。 分子吸收光谱比较复杂，这是由于分子结构的复杂性所引起的。 分子的能量： E分子=E电子+E振动+E转动 分子内部三种不同运动涉及三种跃迁能级三种能级跃迁所需能量大小的顺序为 △E电子＞△E振动＞ △E转动 所以需要不同能量（波长）的电磁辐射使它们跃迁，即在不同的光学区出现吸收谱带： △E电子(1～20eV)对应的是紫外及可见光谱 △E振动(0.05～1eV)对应的红外光谱 △E转动（0.005～0.05eV） 当分子的价电子能级发生跃迁常伴随着振动能级和转动能级的跃迁，故价电子在每两个能级间的跃迁所对应的能量差往往不是象原子那样表现为一个确定的数值，而是表现为多个彼此相差很小的数值，因此，紫外可见光谱为带状光谱。 透过光强度It与入射光强度I0之比称为透射比或透光度，用T表示： 溶液的透射比愈大，表示它对光的吸收愈小；相反，透射比愈小，表示它对光的吸收愈大。 实践证明，溶液对光的吸收程度，与溶液浓度、液层厚度及入射光波长等因素有关。保持入射光波长不变，朗伯(Lambert J H)和比尔(Beer A)分别研究了光的吸收与溶液层的厚度及溶液浓度的定量关系，二者结合称为朗伯-比尔定律，也称为光的吸收定律。 A为吸光度 K为比例常数 当一束强度为I0的平行单色光垂直照射到长度为b的液层、浓度为c的溶液时，由于溶液中吸光质点的吸收，通过溶液后光的强度减弱为I，则 上式是朗伯-比尔定律的数学表达式。它表明：当一束单色光通过含有吸光物质的溶液后，溶液的吸光度与吸光物质的浓度及吸收层厚度成正比。这是进行定量分析的理论基础。式中比例常数K与吸光物质的性质、入射光波长及温度等因素有关。 吸光度A与溶液的透射比的关系为： 上式中的K值随c、b所取单位