酶工程课件 第一章方案研究.pptVIP

第三节 固定化细胞和原生质体 1、概念 2、固定化方法特点 3、应用 1）微生物：酒精、氨基酸、有机酸、色素、辅酶 2）废水处理 第四节 固定化酶的表征 1、活力单位 u/mg（干固体） 2、偶联率=（加入酶活力数—上清中酶活力数）/酶活力数 3、半衰期：在连续工作的情况下、固定化酶活力下降为原来最高活力的一半所需的时间 第五节 固定化酶和固定化细胞 的应用 1、亲和分离系统：例如：亲和色谱对于药用重组蛋白的纯化十分有效 2、药物控释载体：在基因治疗中，如用红细胞生成素（EPO）基因治疗贫血，可将表达EPO的工程细胞株包埋于一小囊内植入组织中，达到缓释EPO的效果。 3、生物传感器：如Pharmacia公司BIA系统和目前市售的葡萄糖检测仪，免疫分析检测早孕等 4、工业和环保：固定化葡萄糖异构酶生产果葡糖浆，固定化细菌处理印染废水 实例： 1、固定化酰化酶制备：18.5克DEAE葡聚糖凝胶A-25（OH型），悬浮于100毫升蒸馏水中，加入1670毫升米曲酰化酶溶液，搅拌5小时后放置过夜，过滤弃去滤液，沉淀与1000毫升蒸馏水搅拌1小时，过滤弃去滤液，如此反复用蒸馏水洗1-2次，依次用1000毫升醋酸钠和1000毫升蒸馏水按上述方法洗一次，过滤弃去滤液，沉淀悬浮于500毫升蒸馏水中，冷冻干燥得到19.6克固定化米曲酰化酶干粉，简称DSA络合物。DSA络合物（19.6克）在37℃ 水解15700微克分子乙酰-L-甲硫氨酸/小时，在72 ℃水解41600微克分子乙酰-L-甲硫氨酸/小时，而72 ℃是DSA络合物最适温度。 2、以固定化米曲酰化酶于中间工厂生产L-色氨酸。酶柱连续工作50天（45℃ ）酶活力损失25-30%，其简单工艺流程见图16.6。 图16 三醋酸纤维素包埋酰化酶生产L-色氨酸流程 D1---储消旋酰化氨基酸容器; R---酶反应器;P---循环; D2和D3---储蓄器; E---蒸发器;S1和S2---离心器;D4---消旋化槽. 问题: 1.如何分离乙酰氨基酸和L-氨基酸? 2.如何将乙酰-D-氨基酸消旋? 某些L-氨基酸在水中溶解度远低于其酰化-D-氨基酸,将酶水解液浓缩则L-氨基酸结晶析出.过滤或离心后得到L-氨基酸结晶,再经重结晶后可得旋光纯的L-氨基酸.也可用离子交换树脂将其分离. 第七章 酶反应器 1.什么是酶反应器? 2.酶反应器有哪些类型?它们各有何特点? 3.固定化对酶反应器有何优缺点? 优点:转化效率高,特别是当产物对反应有抑制作用时. 缺点:pH和温度难控制,易产生压降和压密. （7）第一次DEAE纤维素柱层析：将酶活力峰收集得300毫升，加入205克硫酸铵，0.9为饱和度，放置2小时，离心，沉淀溶于20毫升0.05M醋酸缓冲液（pH 6.0）中，并对缓冲液透析。 （8）第二次DEAE-纤维素柱层析：所得的26毫升浓缩酶液用同样方法在DEAE纤维素柱层析一次，酶集中在一个峰内流出，收集后透析过夜，得12毫升。 （9）第二次葡聚糖凝胶G-100过滤：酶活力集中在一个峰内。收集后对流动蒸馏水透析过夜。透析液放在盛有P2O5的干燥器里在4 ℃冷冻干燥。得到纯的酶制剂。超离心检查只有一个峰，电泳也是均一的，等电聚焦结果也是一个蛋白峰，等电点为4.5。 问题： 1、制酶粉时为何用有机溶剂沉淀而不用盐析？ 2、得到酶沉淀后能否停下来室温放置过夜再做（会变性和变坏吗？） 3、鉴定酶是否纯的方法有哪些？ 4、硫酸铵饱和度是指什么？ 第六节 酶制剂 一、种类： 状态：液体、固体（粉末、冻干粉、结晶） 二、级别： 医药级：纯 无抗原 食品级：无重金属、细菌含量不超标 工业级： 研究级： 三、各种酶制剂的特点 1、冻干粉、SOD稳定价格贵、医药或保健品 2、粉末：稳定可大量生产，价格低，食品级 3、液体：价格便宜，不稳定，不易运输，工业级 4、结晶：有规则的排列（研究级）。 粉末无定型 40%开始下降，60%过饱和，熵最低到结晶 第七节 酶活力测定 1、酶活力单位（U）：在一定条件下，一般是指最适条件，1分钟内能使1umol底物转化为产物所需的酶量为1U，国际单位IU 2、酶浓度：单位体积内所含的酶活力单位（U/ml） 3、比活力: 单位重量中所含的酶活力单位(U/mg） 4、酶活力的测定条件：1）V= V0 2）S E （a）t达到一定时，p达最大 （b）V0一定（可以认为）V0= V 问 题: 1.判断反应速度的标准是什么? 2.多长时间内为反应速度? 小于5%的