活体分析化学试验室2012年工作总结主任.pdfVIP

活体分析化学实验室 2012 年度工作总结 主任：陈 义 副主任：毛兰群 主任助理：汪福意 本年度共承担各类国家项目 46 项：主持国家基金委重大研究计划 2 项、重 大国际合作 1 项、重点项目 2 项、仪器专项 2 项、面上基金 14 项、外国青年科 学家基金1项，参加重大项目1项，仪器专项1项；主持科技部创新方法工作专 项1项、“863”项目1项，参加创新方法工作专项1项、“973”课题4项；主持 中科院创新交叉团队1项、科研装备项目1项、方向性项目课题1项、实施中科 院“百人计划”1项、“技术百人”1项，参加方向性项目课题1项、仪器项目1 项；实施化学所“百人计划”1项，其他项目7项。 一、主要研究工作进展 1. 仪器研制 构建了一套常压离子阱颗粒质谱新系统，该系统使用空气动力学进样方法， 可以在大气压下直接分析各种颗粒样品，如溶液中的细菌、固体颗粒，准确测定 了健康和贫血红细胞的质量（30.4pg 和 24.7pg）和水中的大肠杆菌细菌团簇质 量 为 423fg ， 进 而 获 得 单 颗 大 肠 杆 菌 的 质 量 为 84fg ； 使 用 Poincare-Lighthill-Kuo(PLK)微扰方法，求解了Paul离子阱中r-z方向耦合运 动的非线性离子Mathieu方程，揭示了离子非线性共振的本质，获得了不同参数 下离子阱稳定岛的形成过程以及离子运动特性。 研制出新型石英晶体微天平传感系统（QCM），该传感系统主要由内置石英芯 片的传感单元、传感工作台、温控单元、振荡器、信号采集与传输系统、电源等 模块组成。传感器工作台置放QCM芯片部分具有耐高温、高电绝缘性、优异的化 学稳定性以及良好的机械强度和尺寸稳定性。采用了有源和恒温晶体振荡器，可 产生稳定的振荡频率，并具有优异的抗干扰能力。 2．生物识别与选择分析 （1）信号转导与抗癌药物 ① 在保留分子靶向抗肿瘤药物 Iressa 药效骨架基础上，将两类荧光基团 （中 性红和荧光素）分别共价结合在其喹唑啉环上，设计构建了两类不同性质的荧光 探针。该类探针不仅是一种很好的 EGFR 抑制剂，还能作为一种高灵敏的光学探 针应用于肿瘤细胞的成像和生物标志物 EGFR 的定量检测。 ② 以EGFR 抑制剂吉非替尼类似物为配体，设计、合成和表征了一系列钌/ 铂基金属配合物。体外实验表明，这一系列配合物均具有较高的 EGFR 抑制活性， 其中 6 种配合物对高表达 EGFR 的肿瘤细胞的 EGF 诱导增殖表现出选择性抑制 活性。 ③ 比较研究了三种钌配合物和顺铂与转铁蛋白（Tf ）的相互作用及其对金 属配合物细胞摄入和生物利用度的影响。结果表明，顺铂和钌配合物与 Tf 表面 残基的结合不影响 Tf 与其受体的特异性识别。但是，与 Tf 结合显著降低顺铂的 细胞摄入量和生物利用度，而对有机金属钌化合物的细胞摄入量几乎没有影响， 对其生物利用度还有一定的增强作用。 ④ 比较研究了有机金属钌抗肿瘤化合物及顺铂与谷胱甘肽转移酶(GSTs) 的 相互作用和作用位点。结果表明三种钌基配合物均能与两种 GST 相互作用，但 结合位点不尽相同。进一步的研究表明，正是不同的作用位点导致三种钌基配合 物对两种 GST 表现出不同程度的活性抑制。 ⑤ 构建了一种顺铂损伤 DNA 纳米探针，捕获肿瘤细胞裂解液中与损伤 DNA 相互识别的蛋白质，进而应用质谱分析方法鉴定了捕获的蛋白质复合物， 建立了金属抗肿瘤药物细胞应答机制的研究平台。 ⑥ 建立 Bottom-up 和 Top-down 相结合的质谱方法，鉴定了有机金属钌化物 与单链 DNA 的结合位点。研究发现，DNA 链上的 T 碱基能与 G 碱基竞争与钌 的结合，并且T 对 G 的钌化有促进作用。同时发现有机金属钌化合物对于DNA 链中部的 T 表现出较高的亲和力。 ⑦ 使用磁性二氧化钛微球对人血清中内生性磷酸化肽段进行分离富集，在 此基础上建立了适用于生物样品中磷酸化肽质谱定量分析方法，并用于正常人与 癌症病人血清中内生性磷酸化肽段的差异分析。 ⑧ 以新肝癌标志蛋白 LAPTM4B 为模型，模拟体内氧化环境，研究了其胞 外区多肽 EL2 的氧化修饰/去修饰状态。利用 HPLC 、Q-TOF MS 对修饰反应产 物进行分析检测，表明 EL2 多肽中的甲硫氨酸极易被体内的氧自由基氧化。该 位点的修饰状态可能在 LA