江西25个猪场PCV的检测.ppt

江西25个猪场猪圆环病毒感染的检测 一、概述 1 历史与分布 2 病原学 3 流行病学 4 临床症状与病理变化 5 致病机理 6 诊断 7 防治措施 8 问题和探索 1历史与分布 2病原学 4临床症状与病理变化 5致病机理 6诊断 7防治措施 PCV-2直接导致的这些病发病率和病死率均不太高，但是由PCV-2引起的亚临床感染和免疫功能低下带来的经济损失却很大。 随着异种动物器官移植、转基因医药工程等高新技术迅猛发展，猪已被公认为是人类最理想器官提供动物，而PCV则很可能成为人体健康的潜在威胁现在。 如果真有一些传染性和非传染性的触发因子在发生PMWS的地方存在并占据优势的话，我们的任务就是确认并识别它们。 二、实验研究 1　材料的采集和DNA的提取 2　 PCR扩增和酶切鉴定 3　全基因组扩增 4　胶回收 5　测序 6　对江西25个猪场病料的检测 2　实验结果 2　PCV2的PCR扩增和酶切鉴定 三、讨论与小结 利用PCV-1和PCV-2的特异性引物，经PCR扩增获得了PCV-1和PCV-2的特异性DNA片断。同时用两对特异性的PCV-2的引物用PCR技术扩增了jxpcv2-1和jxpcv2-2的全基因组序列,经过扩增产物纯化测序，并对测序结果进行拼接，得到与Gen-Bank中提供的PCV-2高度同源的序列，从而验证了本实验方法的准确性和可行性。 三、讨论与小结 利用PCR在江西成功建立了PCV的特异性检测方法，证明了江西不仅存在PCV的感染，且感染率也较高。 序列分析结果表明本研究中测序的二株PCV-2病毒的核酸序列差异不大这为江西PCVD的免疫的防制提供了理论依据。 三、讨论与小结 从全基因组系统发育分析，本研究的两个分离株与国内周边几个省的分离株亲缘关系较大，而与欧美大多数分离株的亲缘关系较远，提示江西PCV-2的流行可能与近年来从周边地区频繁引种有关，并且也证明了不同地域的分离株存在一定程度的区域保守性。 6、对江西部分地区猪场病料的检测 肺 余江 13 淋巴结 万年 25 肺 南昌县 12 淋巴结 赣州 24 淋巴结 宜丰 11 淋巴结 樟树 23 淋巴结 高安 10 肺 九江 22 脾脏 吉安 9 淋巴结 九江 21 脾脏 吉安 8 淋巴结 进贤 20 淋巴结 横峰 7 淋巴结 鹰潭 19 淋巴结 高安 6 肺 进贤 18 肺 永丰 5 肺 成新 17 淋巴结 南昌县 4 肺 上高 16 肺 樟树 3 肺 樟树 15 淋巴结 新建 2 肺 宜春 14 肺 南昌县 1 部位 来源 序号 部位 来源 序号 建立了PCV的特异性PCR检测方法，从江西的25个出现明显PMWS症状的猪场中采集的病料检测到PCV-1、PCV-2 1　PCV1的PCR扩增和酶切鉴定 2　 PCV2 的PCR扩增和酶切鉴定 3　全基因组扩增 4　测序结果 5　对江西部分地区猪场病料的检测 1　PCV1的PCR扩增和酶切鉴定 PCV1扩增电泳图和EcoRⅤ酶切图 652bp 478bp 174bp 652bp 1154bp 931bp 223bp PCV2扩增电泳图和EcoRⅠ酶切图 1154bp 3　全基因组扩增 1069bp 用PCV-2的第二对引物进扩增 第一对引物扩增为阳性的病料 4　测序结果 　阳性病料2　1.768×103bp 同源性比较发现二株PCV-2病毒之间核苷酸的同源率为99.4% 北京 台湾 阳性病料1 1.767×103bp 5　对江西部分地区猪场病料的检测 江西猪场PCV感染情况初步调查 25（总数） 9 1 3 12 PCV1 ＋ ＋ － － PCV2 ＋ － ＋ － 注：“＋”表示阳性；“－”表示阴性 PCV-2的阳性率为45%， PCV-1的阳性率为40% * * 2004年10月 首届江西科学家学术年会 何后军 戴益民 江西农业大学　　 Gardan Allan在2000年对猪血清中Ⅱ型猪圆环病毒（PCV-2）抗体及对猪组织样品所作的回顾性检测结果表明：PCV-2至少从1969年起就已存在于猪群中了 1969年 1978年 1982年 1986年 德国的Tischer首次从猪肾传代细胞系PK-15中分离出猪圆环病毒（PCV） Tischer证实该病毒来源于当初制备的PK-15细胞的猪肾细胞，其基因组由一个单股圆环状的DNA组成，是一种新发现的病毒，并将其命名为猪圆环病毒（PCV）。 Tischer等证实，1986年以来在西班牙、英格兰就已有PMWS发生了 加拿大的萨斯彻温首次报告了这种以部分断乳猪和育肥猪中出现生长缓慢、呼吸急迫、消瘦、贫血、黄疸为主要临床表现；剖检可见有淋巴结肿大，肝变硬，多灶性卡他性气管炎，间质性肺炎和肾炎的疾病。当时将之命名为