以原花青素B2标定葡萄籽提取物中原花青素含量.docVIP

以原花青素B2标定葡萄籽提取物中原花青素含量 吴 巍，程秀凤，王春辉，崔文熹，傅荧荧 （天津市尖峰天然产物研究开发有限公司，天津 300457） 摘要：目的：建立以原花青素B2为标准品测定葡萄籽提取物中原花青素含量的方法。方法：以含量≥99%的原花青素B2（HPLC标定）做标准品，参照Bate-Smith法，在546 nm处测定吸光度，来标定葡萄籽提取物中原花青素含量。结果：原花青素B2通过Bate-Smith法反应后的吸收度与浓度成良好线性关系，其线性范围为22.89μg.mL-1～ 114.5μg.mL-1，r=0.99902（n=5）Determine proanthocyanidins in grape seed extract with proanthocyanidin B2 standard WU Wei ，CHENG Xiu-feng，WANG Chun-hui，CUI Wen-xi，FU Ying-ying （Tianjin Jianfeng Natural product RD Co.，Ltd.，Tianjin 300457，China） Abstract: Objective: To establish a method for detecting proanthocyanidins in grape seed extract with proanthocyanidin B2 standard. Methods: Refer to the Bate-Smith method, using proanthocyanidin B2（≥99%;HPLC）to calibrate proanthocyanidins in grape seed extract at 546nm. Results: Linear range of proanthocyanidins is 22.89μg.mL-1～ 114.5μg.mL-1 (r=0.99902, n=5) ,Recovery: 97.99%, RSD: 1.02%( n=6 ). Conclusion: Using single ingredient proanthocyanidin B2 standard calibrated by HPLC to calibrate proanthocyanidins, resolving the problem that the standard content is not identical and can not convince when using proanthocyanidin compound standard. The method have better linearity and repeatability , can detect grape seed extract’s proanthocyanidins exactly. Key Words: proanthocyanidin B2; proanthocyanidin; grape seed extract 原花青素是一类物质，它们是由儿茶素、表儿茶素及其没食子酸酯通过C4-C6或C4-C8键共价相连组成的多聚体，葡萄籽提取物中的最主要成分就是原花青素，各种聚合程度的原花青素在其中混合存在着，测定其中总原花青素的含量是衡量其质量好坏的主要指标之一。然而目前原花青素的测定存在着一些问题。首先，虽然测定原花青素方法的细节各不相同，但基本上都是基于Bates—Smith法，而Bates—Smith法测定的结果是一个值，即原花青素值，它是不带百分号的，而国内一些厂商误把它当作百分含量[1]；而另外一些方法[2] [3]有了进步，引入了原花青素对照样，然而它们的原花青素对照仍是混合物，如何确定其对照样的含量仍然是无法让人信服。为此，我们采用原花青素B2纯品（原花青素二聚体之一，HPLC检测≥99%）作为对照，测定葡萄籽提取物中的原花青素含量。 1 仪器和试药 岛津公司产UV-2401紫外可见分光光度计；AS3120超声波清洗器（天津奥特赛恩斯公司）；水浴锅（天津实验电炉有限公司）；XYE2-10-H超纯水机（）；市场上按原花青素95%规格销售的葡萄籽提取物；原花青素B2（Proanthocyanidin B2）mol／L盐酸中），混匀，盖上瓶盖，用生料带把瓶口缠严，放于（100±2℃）水浴中，水浴40分钟后，取出置冷水浴（2～10℃）中迅速冷却20分钟，于546nm处测定吸光度。 2.4 线性关系考察 分别吸取标准品溶液0.25，0.5，0.75，1.0，1.25mL置于10mL棕色容量瓶中，分别加甲醇定容至刻度摇匀