离子交换层析柱和填料选择指引.pdf

GE医疗中国 离子交换层析柱和填料 选择指南 GE梦想启动未来 一般信息 样品 离子交换层析的原理 平衡 上样体积 梯度洗脱 洗涤 再平衡 高盐洗涤 离子交换（IEX）层析能够分离电荷只有轻微差别的 1 M 5 CV 紧密结合 一分子或组分子。以保证分离是基于带电分子与带 的分子在 不结合的分子在 相反电荷的层析填料之间的可逆相互作用。通常情况 梯度开始前被洗脱 高盐洗涤 ] l 中被洗脱 下，选择条件被感兴趣的分子随着上样柱上而结合到 C a N [ 层析填料然后改变条件以便使被结合的物质被洗脱。 10–20 CV 经常通过连续梯度或逐步增加离子强度进行洗脱，最 5–10 CV 常使用NaCl。图1显示典型的高分辨率梯度洗脱。阶 0 5–10 CV 柱体积（CV） 段洗脱如图3所示。 图1.使用梯度洗脱的典型IEX分离。 蛋白质由含有可以被测定的弱酸和弱碱基团（即电离 一般信息选择性和缓冲液pH 基团）。因此，蛋白质的净表面电荷是高度依赖的p 图2显示pH对选择性的影响。三种假定蛋白在不同pH H，并将随着环境pH变化而逐渐改变。每种蛋白质都 下的分离如下所述，在图中阐明四种情景（见编号的 有其针对pH的独特静电荷关系，这可以被视为滴定 箭头）。 曲线（图2）。这条曲线反映了蛋白质整体净电荷如 何根据环境的pH变化。可以在不同的pH值下利用IEX 酸性最强pH ：所有三种蛋白都处于它们的等电 以分离具有截然不同电荷性质的多种蛋白。图2显示 点，带正电荷，且只结合阳离子交换剂。蛋白质按 如何选择正确的pH（实现令人满意的分最重要参数 照它们的净电荷顺序被洗脱下来。 之一）。