革兰氏染色与荚膜染色一.pptVIP

实验二、革兰氏染色与荚膜染色 一、实验目的 1、掌握细菌革兰氏染色及荚膜染色的原理与操作 2、进一步熟练掌握显微镜的使用、细菌染色技术及无菌操作技术 二、实验材料 1、电光源双目显微镜 2、培养18~20小时的枯草芽胞杆菌、四联球菌、培养24小时的大肠杆菌及硅酸盐细菌斜面 三、试验内容 （一）革兰氏染色 1、原理 革兰氏染色是细菌学上重要的鉴别染色法。革兰氏阴性菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的脂类物质，而且肽聚糖层较薄，交联度低，当用乙醇脱色时，乙醇溶解了脂类物质，增加了细胞壁的通透性，使结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌被脱色，再经蕃红复染就染成红色；革兰氏阳性菌的细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，脂含量少，经脱色处理反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染剂（结晶紫）的颜色，呈现蓝紫色。 2、操作步骤 （1）制片 涂片、干燥、固定 （2）染色 结晶紫初染1分钟，水洗 碘液媒染1分钟，水洗 乙醇脱色20～30秒，水洗 关键！ 番红复染2分钟，水洗 （3）镜检 干燥后，用油镜观察 1、原理 荚膜是某些细菌在生活过程中形成的，分泌于细胞壁外的一层松散透明的、富含水分的、多糖类粘液性物质，其折光性低，与染料的亲合力弱，不易着色，也不能强制着色，故常用负染色法，即使菌体和背景着色而荚膜不着色，染色后荚膜在菌体周围呈透明圈状。 Leifson染色法 1、制片：涂片 自然干燥 2、Leifson染色液染色10分钟，倾去多余染料 （勿水洗） 3、硼酸钠美蓝染色5分钟，水洗，自然干燥 4、油镜下观察：菌体呈蓝色，荚膜呈红色 四、实验报告 1、革兰氏染色的原理是什么？关键步骤是什么？影响革兰氏染色结果的因素有哪些？ 2、在给出G+、 G-标准菌株的情况下，如何确保待检测菌株的革兰氏染色结果的准确性？ 3、荚膜染色的原理是什么？绘图表示所观察到的菌体形态，并注明菌体和荚膜的颜色。 4、酵母菌和原生质体能进行革兰氏染色吗？结果如何?为什么？ 5、实验结果讨论 * * 生命科学学院微生物学系 电话：8242908 实验内容 实验一、显微镜的使用与单染色法 实验二、革兰氏染色与荚膜染色 实验三、放线菌形态观察与芽孢染色 实验四、霉菌形态观察与各大类微生物菌落特征 实验五、酵母菌形态观察、显微计数与显微测量技术 实验六、培养基的制备 实验七、菌种分离纯化技术与平板菌落计数 实验八、水质微生物学检测 实验九、消毒与灭菌技术 少，占细胞干重10~20% 多，约11~22% 多 - + 多，占细胞干重50~80% 少，约1~4% 少 多数有 - 肽聚糖 类脂含量 脂蛋白 磷壁酸 脂多糖 革兰氏阴性菌 革兰氏阳性菌 细胞壁 革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌细胞壁成分比较 革兰氏阳性菌—产气荚膜梭菌（ × 800） 革兰氏阴性菌—大肠杆菌（ × 500） （二）荚膜染色