多重PCR在乳制品中的检测.pptVIP

多重PCR技术在乳制品中的检测 一 PCR技术的基本原理 　 PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成。类似于DNA的体内复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。 设置变性-退火-延伸三个温度点 设置变性-退火-延伸三个温度点 标准反应中采用三温度点法，双链DNA在90～95℃变性，再迅速冷却至40 ～60℃，引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至70～75℃，在Taq DNA 聚合酶的作用下，使引物链沿模板延伸 多重PCR的作用 一般的PCR即1次实验只能检测1种病原细菌 ,而乳样品中往往存在的致病菌种类很多 ,有可能涉及不同种和型的细菌。因此近年来出现了一些1 次实验能同时检测多种致病菌的检测方法 ,多重 PCR multiplex PCR 就是其中一种,此项技术的应用有效地克服了以上技术的缺点 ,可以同时检测多种致病菌 ,其快速、简便、灵敏度高 ,并且能够满足实验室快速检测的要求。 乳制品中的菌种 沙门氏菌,金黄色葡萄球菌和志贺氏菌是乳制品中最常见的 种致病菌,在乳制品国家卫生标准中三者均是需要强制检验的项目。 本研究将探索一种以多重PCR技术为基础的乳制品中沙门氏菌 金黄色葡萄球菌和志贺氏菌同时 增菌和检出的快速方法，将检测周期缩短至以内10h，提高检测通量，且具备良好的特异性和灵敏度 基本步骤 1目的基因的选择及引物的设计 2标准菌株的