生物分离技术与原理知识点汇总.pdf

生物分离原理与技术 急速冷却，使胞壁结构破坏。适用：细菌及病毒等中对热不太敏感的物质提取。（5） 生物分离技术与原理知识点汇总 干燥法：热空气干燥法适用于酵母，真空干燥法适用于细菌，冷冻干燥法适用于不稳 第一章 绪论 定的酶。 1、各类分离纯化技术分别利用了生物分子的哪些特性来实现分离？利用这些性质进 化学法：(1)溶剂处理法。丙酮、氯仿、甲苯等脂溶性溶剂可溶解胞膜上脂质化合 行分离的方法有哪些？ 物，使细胞结构破坏。(2)表面活性剂法。添加如十二烷基磺酸钠、去氧胆酸钠等，通 ⑴形状和大小:凝胶过滤、超滤、透析;⑵电荷性质:离子交换层析、电泳（除SDS）; 过破坏细胞膜而破碎细胞，释放目的物。此法常需与其它方法结合应用。 ⑶极性（疏水性）:疏水层析、反相层析;⑷生物功能或特殊化学基团:亲和层析;⑸等 酶解法：(1) 自溶法，将欲破碎细胞在一定条件（pH、T ）下保温一定时间，通过 电点 pI:层析聚焦、等电聚焦、等电点沉淀;⑹溶解性:盐析、有机溶剂提取、结晶;⑺ 细胞本身存在的酶系的作用，将细胞破坏，使胞内物质释放。(2)外加酶法。利用各 密度、大小:超离心、SDS。 种水解酶专一性地将细胞壁分解，使内含物释放出来。细菌：加溶菌酶（结合反复冻 2、一个完整的分离纯化操作有哪些基本步骤？各个阶段所用的分离方法分别侧重哪 融或加EDTA）。酵母：采用β- 葡聚糖酶。霉菌：添加几丁质酶。植物材料：加纤维 些指标？ 素酶、半纤维素酶和果胶酶等。 生化分离基本步骤：（1）选材: 来源丰富，含量相对较高，杂质尽可能少。（2 ） 发展方向：（1）多种破碎方法相结合。（2 ）与上游过程相结合。（3）与下游过程 提取（预处理）：将目的物从材料中以溶解状态释放出来，方法与存在部位及状态有 相结合。 关（3）分离纯化: 核心操作，须根据目的物的理化性质，生物学性质及具体条件确 2、简述盐析与有机溶剂沉淀方法的原理、主要应用范围及分级范围的选择依据，比 定。（4 ）浓缩、结晶、干燥。（5）保存。整个过程应有快速灵敏准确的分析方法来衡 较这两种方法的优缺点和差异。 量效果（收率、纯度）。 盐析。原理：“盐溶”低浓度中性盐离子对蛋白质分子表面极性基团及水活度的影 第二章 生物样品的预处理 响，增加蛋白质与溶剂相互作用力，使其溶解度增大。“盐析” 中性盐浓度增加至一定 1、简述常用细胞破碎的主要方法、原理、特点、适用范围及细胞破碎今后的发展方 值时，水分子定向排列，活度大大减少，蛋白质表面电荷被中和，水膜被破坏，从而 向。 聚集沉淀。盐析范围的确定:可采用盐浓度对蛋白质沉淀量的盐析曲线测得（从回收 机械法:(1)胞捣碎法。原理：机械运动产生剪切力，适用于动植物组织。（2 ）高 率和纯度考虑）。盐析的优点：成本低，不需要特别昂贵的设备；操作简单，安全； 速匀浆法。破碎程度较上法好，且机械剪切力对生物大分子的破坏较小，处理量大。 不会引起蛋白质变性，经透析去盐后，能得到保持生物活性的纯化蛋白质。缺点:效 原理：利用高压使细胞悬浮液通过针型阀，由于突然的减压和高速冲击撞击环使细胞 果不理想，通常只是作为初步的分离纯化，还需要结合其它的纯化。 破碎。适用于：较柔软、易分散的组织细胞。（3）研磨法和珠磨法。由陶瓷的研钵和