高中生物竞赛辅导教程—DNA复制1.pptVIP

复制概况 复制体系 复制的起始、延伸与终止 其他原核生物的复制体系 其他形式的复制 真核生物的复制过程;1 DNA复制的基本机理－半保留复制 2 DNA复制的起点、方向和方式 3 DNA聚合酶和DNA聚合反应 4 复制的基本过程 5 DNA复制的半不连续性; 1 、DNA复制的基本机理－半保留复制 半保留复制： DNA在复制时，以亲代DNA的每一条链作模板，合成完全相同的两个双链子代DNA，每个子代DNA中都含有一条亲代DNA链。;全保留复制;DNA半保留复制的实验依据： 1958年 Meselson Stahl E.coli 放射性同位素（15N）标记 CsCl密度梯度离心 ;培养一代;亲代;DNA半保留复制的意义：保证DNA代谢的稳定性。 经过多代的复制，亲代的遗传特征完整无误的传递给子代，子代DNA仍可以保持与最初亲本的一致性。 稳定性是相对的，变异是绝对的;复制子(replicon)或复制单元： DNA分子上一个独立的复制单位，DNA复制从起点开始，进行到终点结束。 一个复制子包括一个复制起点和复制终点。;复制起点具有特征性： 细菌、酵母以及叶绿体、线粒体等的DNA复制起点已经被克隆，其核酸序列的共同特点是富含A-T序列。;2.2 DNA复制的方向：; 复制叉（Replication fork）：染色体中参与复制的活性区域，即复制正在发生的位点。 ;;真核生物DNA分子复制具有多个复制子，多个复制眼;;2.3 DNA复制的方式 双向等速复制：大多数生物体内DNA。 不等速复制：如枯草杆菌。 对称复制：大多数生物体内的DNA的两条链同时复制。 不对称复制：在一定时期内DNA只复制一条链的情况。 如线粒体的D-环复制和噬菌体的滚环复制方式。; 3 DNA聚合酶和DNA聚合反应 ;4 DNA复制的半不连续性; ;DNA聚合酶 DNA连接酶 螺旋酶 单链结合蛋白 DNA拓扑异构酶 ; 1 DNA聚合酶 ;共同性质: [1] 以脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)为原料; [2] 需要模板; [3] 不能起始合成新的DNA链, 需要引物; [4] 合成方向5‘→3’ 。; 1 DNA聚合酶;1.1 大肠杆菌的DNA聚合酶;1.1.1 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ DNA polymeraseⅠ，DNApolⅠ 1956年，Arthur Kornberg;（2）功能特点;;切口移位反应;　缺口平移标记DNA探针 ;枯草杆菌蛋白酶处理后，成两个片段，大片??68KD，称为Klenow片段。; 1.1.2 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅱ(DNApolⅡ)： (1) 理化性质： 120KD， 100个酶分子/细胞， 活性只有DNA polⅠ的5%。;（2）功能特点： 5′→3′聚合活性 3′→5′外切活性， 没有5′→3′外切活性 不是复制的主要聚合酶, 与DNA损伤修复有关。;;1.1.3 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ (DNApolⅢ);; DNA聚合酶Ⅲ含有以下4个不同的功能组分： 1）核心聚合酶: 由α、ε、θ三种亚基组成。 功能： α亚基具有5’-3’方向合成DNA的催化活性。 ε亚基具有3’ -5’外切核酸酶的校对功能， θ亚基促进ε亚基的作用。; 2）β二聚体 β亚基以二聚体、环状的形式环绕着DNA并在DNA自由滑动，构成一个滑动钳。 功能：滑动钳把全酶束缚在模板DNA上，保证高度的进行性。; 3）γ复合物 含有5种亚基：γ2δ1δ’1χ1ψ1。 功能:γ复合物是β滑动钳的载体，帮助β滑动钳结合到DNA上。 γ复合物有依赖DNA的ATP酶活性。 β二聚体自己并不能组装到DNA上，通过γ复合物与ATP协同作用催化ATP的水解而组装到DNA上的。; 4）τ二聚体 功能：τ2 将两个核心酶分子和一个γ复合物连接起来。 τ亚基是一个依赖于DNA的ATP酶。;; 表 E.coli 中的三种DNA多聚酶 ; 1.2 DNA聚合酶和复制的忠实性 复制过程的忠实性是保证生物体遗传信息准确传递的一个必要条件，它取决于碱基配对的专一性。 DNA聚合酶可以通过以下方式提高互补碱基选择的专一性。;1）碱基配对原则维持DNA复制的准确性： 2） DNA聚合酶本身的校对作用 DNApol的3’?5’外切酶活性可切除错配碱基，使得DNA复制错误的机会只有10-8-10-10。 3) 需要RNA引物起始DNA复制，DNApol只能从引物的3’ 端延伸DNA 碱基配对协同性使得最初几个碱基错配率高，而RNA引物最终被降解而避免错误。 4）后随链的不连续