超敏可逆蛋白染色试剂盒-深圳中联生物科技开发有限公司.DOCVIP

深圳市中联生物科技开发有限公司 ZL Biotech Corporation 地 址：深圳市南山区桃源街道留仙大道1183号南山云谷创新产业园综合服务楼506-508 电 话：0755传真：0755-8655 0193 网 址： 超敏可逆蛋白染色试剂盒 一、试剂盒组成、储存、稳定性 试剂盒组成 保存 PP1201 PP1202 染色液 室温避光 125ml 250ml 显色液 室温避光 125ml 250ml 脱色液 室温避光 125ml 250ml �{产品收到后按照上面指示温度存放各成份 ，12 个月内有效。 二、原理简介 超敏可逆蛋白染色试剂盒适用于快速检测PAGE胶上的微量蛋白 质，它的敏感度�{乎可以达到银染的敏感度（纳克级水平或者更高）， 但是比银染简单，稳定，重复性高。染色液所含有的成份和 PAGE 胶 中的 SDS，TRIS 共同作用形成特殊复合物沉淀在胶基质中形成黑色的 背景染色。有蛋白的地方，蛋白质的存在干扰这种复合物沉淀的形成， 因此蛋白条带仍旧保持透明无色，在黑色的背景下，就可以清晰见到 透明的蛋白条带。 三、产品特点 1． 电泳后采用两个简单步骤，15 分钟内完成全部过程。 2． 环保染料，完全不含有各种醋酸，甲醇等有毒有刺激性成份。 3． 蛋白条带为不透明白背景上的透明条带，灵敏度为传统方法  的 10 �{以上（纳克级或者更高）。 4． 可逆染色，完全不影响蛋白性质，如果需要可以脱色 15 分 钟后继续做蛋白电洗脱（切下特定条带脱色后洗脱下来可以 用来做抗原生产使用），定量；western blot 实验，不影响 抗体抗原结合性质；质谱分析；N 末端测序等等。 5． 在普通双蒸水中可以保留一年以上，不退色，缩小，蛋白质 不扩散，一年后依然可以用来做 western blot 等蛋白微分析。 四、操作步骤 染色 1． 电泳后用清水冲洗胶 30-60 秒钟，然后将 PAGE 胶放置于一 个透明的玻璃培养皿中，根据胶大小倒入适量的染色液（确 保胶都浸没在染色液内，20-25ml 足够染色一块普通的 8X10cm 的 mini 胶了），摇床上轻摇染色 10-15 分钟(10-15% 胶 15 分钟，5-7.5%胶可缩短时间到 10 分钟)。 2． 倒弃染色液，加入 20-25ml 的显色液，立刻同时用手轻摇胶 显色 0.5-1 分钟（将透明培养皿放在一个黑色（暗）背景上 观察条带出现情况，此时在不透明的白背景上应该看到透明 的蛋白条带，不要显色时间过长，过长反而会降低分辨率）。 3． 看到满意条带后，用清水冲洗 1-2 分钟后，放置于蒸馏水中 保存。 脱色 1． 根据个人需要将所需目的条带切下后或者直接整块胶加入 适量脱色液，摇床上轻摇 10 分钟或者直到脱色完全，最后 用清水冲洗�{次。 2． 现在胶可以用于蛋白电洗脱，western blot 等操作，或者 可以再用传统方法永久染色。 五、疑难解答 1. 没有见到条带。 a．应该把透明培养皿放在黑色背景上看，条带为黑背景上 面透明 的条带。 b．染色过头了。染色时要在暗背景上监测蛋白条带出现情 况，一旦见到满意条带要立刻用蒸馏水冲洗停止染色。对于 已经染色过头的胶，可以用脱色液部分脱色（胶脱色后，还 可以再次反复染色）。 c．蛋白浓度太低了，检测上样蛋白的浓度。 2. 干胶后，条带不见了。 这是一种可逆的负染色方法，干燥以后蛋白条带就和背景区 分不出来了，因此不可以做成干胶。如果要长期保存，可以 脱色后再用传统方法染色保存。 3. 染色后未脱色即直接转膜做 western blot 效果不好。 应该脱色后才转膜做 western blot。