2017_2018学年度高中生物专题2微生物的培养与应用课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数练习新人教版选修1.docVIP

课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 筛选菌株的思路及计数 [自读教材·夯基础] 1．筛选菌株的思路 (1)自然界中目的菌株的筛选： 依据：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 实例：PCR技术过程中用到的耐高温的Taq DNA聚合酶，就是从热泉中筛选出来的Taq细菌中提取出来的。 (2)实验室中目的菌株的筛选： ①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。 ②方法：利用选择培养基分离。 a．选择培养基：允许特定微生物生长，同时阻止或抑制其他种类微生物生长的培养基。 b．实例：选择分解尿素的细菌的培养基，以尿素作为唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。 2．统计菌落数目 (1)常用方法：稀释涂布平板法。 ①原理 ②计数原则：一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。 ③结果分析：统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 (2)其他方法：利用显微镜直接计数。 1．阅读教材P22第一段旁栏中的相关内容，并思考回答下列问题。 (1)从物理性质上划分，此培养基属于哪类培养基？从功能上划分呢？ 提示：固体培养基，因为加入了凝固剂琼脂。从功能上看属于选择培养基。 (2)在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 提示：碳源主要是葡萄糖，氮源是尿素。 (3)该培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？ 提示：该培养基对微生物有选择作用。该培养基以尿素为唯一氮源，只允许能以尿素作为氮源的微生物生长。 2．阅读教材P22中部楷体字部分，思考： 哪位同学的结果更接近真实值？他们的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？ 提示：第一位同学只涂布了1个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数值结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值，这两位同学的实验都需要改进。在设计实验时，一定要涂布至少3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致。结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。 3．阅读教材P23上部的楷体字部分，请帮助A同学设置对照实验，以排除其他同学所质疑的可能影响实验结果的因素。 提示： 可能原因 实验验证 结　论 所取土样不同 其他同学用与A同学一样的土样进行实验 若结果与A同学的一致，则说明A无误；若结果与A同学的不一致，则说明A同学操作失误或培养基配制有问题 培养基污染或操作失误 将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作空白对照 若有菌落出现，则说明培养基污染；若无菌落出现，则说明未被污染 [跟随名师·解疑难] 1．选择培养基的类型及作用 (1)在培养基中加入某种化学物质。如加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。这里的加入指的是在培养基的培养成分的基础上加入。 (2)改变培养基中的营养成分。如培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。 (3)改变微生物的培养条件。如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。 2．统计菌落数目 (1)稀释涂布平板法： ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。 ②注意事项： a．设置重复组：同一稀释度下，至少涂布3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。分析结果时，需考虑重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。 b．设置对照：目的是排除实验中非测试因素对实验结果的影响，提高实验的可信度。 ③计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M。 C：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数。 V：代表涂布平板时所用的稀释液的体积。 M：代表稀释倍数。 (2)显微镜直接计数法： 原理：此法利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。 缺点：不能区分细菌的死活。 方法：用计数板计数。计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积为1 mm2和高为0.1 mm的计数室，在1 mm2的面积里又被划分成25个(或16个)中格，每个中格进一步划分成16个(或25个)小格，但计数室都是由400个小格组成的。如下图所示： 计算公式：每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10 000×