环境微生物——汇报.pptVIP

环境微生物实训 实训目的： 通过实训熟练掌握与微生物相关岗位的操作技能，了解相关的理论知识具备应有的职业道德；培养我们收集、分析和处理复杂信息的能力；通过对样品的分析检验，掌握样品微生物检验的基本操作技术将所学的理论知识和操作技能转化为实际的工作能力；提高理论联系实际和运用所学知识分析解决实际问题的能力；培养我们间的相互合作、共同处事的能力；培养我们的组织协调能力。 实验准备 1、取样 2、各种试剂的查找与配置 3、玻璃器皿的灭菌 4、液体与固体培养基的制备 游泳池水中大肠菌群的测定 三倍浓缩乳糖培养液的配制 利用电子天平称取蛋白胨30g、牛肉膏9g、乳糖15g、氯化钠15g全部倒入钢锅中放在加热器上加热并溶解于1000mL蒸馏水中，调整pH为7.2~7.4。最后加入16g/L溴甲酚紫乙醇溶液3mL。 初发酵 取10支装有5mL三倍浓缩乳糖胆盐培养液的试管各加入10mL水样，另取2个装有50mL该培养液的烧杯各加入100mL水样，充分摇匀后，12份培养液中均倒置一支小试管，并使样液充满小试管。置于36℃±1℃的培养箱中，培养24h。并观察结果。 24h后，取出观察到10支试管中有4支有气体产生，2个烧杯中均有气体产生，根据国标认为是推测性试验阳性，6支试管中不产气，为大肠菌群阴性。 品红亚硫酸钠培养基的配制 用电子天平称取琼脂20~30g，放入钢锅中，加入900mL蒸馏水，放到加热炉上加热至溶解，然后加入3.5g磷酸氢二钾及10g蛋白胨，混均使之溶解，加蒸馏水补足至1000mL，调整pH为7.2~7.4，随后加入10g乳糖混均溶解，并放入高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌温度为115℃，压力为0.07MPa，时间为20分钟，取出放置一旁备用。再称取亚硫酸钠5g至无菌空试管中，加入少量蒸馏水使其溶解，在水浴中煮沸10分钟后，立即滴加与20mL50g/L碱性品红乙醇溶液中，直至深红色转变为淡粉红色为止。将此混合液全部加入到已灭菌的培养基中，即做成品红亚硫酸钠培养基。 平板分离 选取3管推测性检验阳性管，分别从中取一接种环培养液，接种到不同的品红亚硫酸钠培养基上，每管做两份平行样。置于36℃±1℃的培养箱中，培养18~24h。 取出观察到有红紫色具有金属光泽的菌落长出。 复发酵 挑取可疑大肠菌群菌落1或2个进行革兰氏染色，同时接种于单倍乳糖发酵管，于36℃±1℃的培养箱中，培养24h。 经过24小时的培养，可以看到试管中的培养液全部由红色变为了黄色，而且小试管中也有气泡产生，而做空白对照的试管中培养液没有变色且没气泡产生。 总大肠菌群（MPN）检索表 实验结论： 经过了多管发酵→平板分离→复发酵，最终证明了游泳池水中有大肠菌群的存在，由于证实实验中试管中阳性菌管数为4支，烧杯中的阳性菌管数为2支，通过查大肠菌群（MPN）检索表，可以查到每1000mL水样中总大肠菌群的MPN值为52。 食堂空气卫生微生物的检测 牛肉膏蛋白胨培养基的制作 用电子天平称取牛肉膏5g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂15g，全部倒入钢锅中，加入1000mL蒸馏水并用万用炉加热，加热至琼脂全部融化即可。 取8个牛肉膏蛋白胨平板，置于空气微生物采样器中进行抽虑，调节流量到20L/min，抽虑2min（国标中空气中微生物检测的用量为30~50L）。置于36℃±1℃的培养箱中，培养24h。 观察结果： 数据表： * 水样 230 60 36 9 161 51 31 8 120 43 27 7 52 24 14 4 70 30 18 5 92 36 22 6 38 18 11 3 27 13 7 2 11 4 ＜3 0 ＞230 69 40 10 18 8 3 1 每升水样中总大肠菌群数 每升水样中总大肠菌群数 每升水样中总大肠菌群数 2 1 0 100mL水量的阳 性管（瓶）数 10mL水量 的阳性管数 空气 微生物 采样器 *