1 25二羟维生素d3对血管加压素介导大鼠心脏成纤维细胞增殖及tgfβ1表达影响 word格式.docx

1,25-二羟维生素D3对血管加压素介导的大鼠心脏成纤维细胞增殖及TGFβ-1表达的影响硕士研究生: 何蕊导师：邓平教授中文摘要目的：通过观察1,25-二羟维生素D3（1,25-dihydroxyvitaminD3,1,25D）对血管加压素（Argipressine，AVP）诱导的大鼠心脏成纤维细胞(cardiac fibmblasts，CFs)增殖的影响及其与转化生长因子β1（transforminggrowth factorβ1，TGFβ-1）的关系，探讨1,25-二羟维生素D3对心肌成纤维细胞增殖的影响及其可能机制。方法：1．大鼠成纤维细胞培养和处理：复苏、传代培养；2．细胞干预培养：将大鼠心脏成纤维细胞分为12孔进行培养，每孔含细胞数53×103 个，共分成四组：AVP 组、VD组、AVP+ VD3组、空白对照组，其中AVP3组共1孔，予以10－7mmol/L AVP处理；VD组共A、B、C、D、E 5孔，分别予以10-10，10-9，10-8，10-7，10-6mol/L浓度的VD处理；AVP+VD组共A、B、C、D、33E5孔，均予以10-7mmol/LAVP处理，并分别予以10-10，10-9，10-8，10-7，10-6mol/L 浓度的VD3处理；空白对照组共1孔，无干预。培养和干预24小时后，留取上清液，收集细胞。3．采用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐法(MTT法)检测各组细胞的的吸光度值；4．采用流式细胞分析仪技术（flowcytometry,FCM）检测各组细胞的DNA合成期（S期）细胞百分比；5．采用反转录PCR(reversetranscription-PCR,RT-PCR)法检测各组细胞的中TGF-β1mRNA表达水平，采用酶联免疫吸附法（enzyme-linkedimmunosorbent assay , ELISA）检测各组细胞培养上清液中TGF-β1的浓度。结果：21．AVP组细胞的吸光度值(1.380±0.008）较空白对照组(1.100±0.015)明显增高，差异有统计学意义（P0.05）;2．AVP+VD3组各孔细胞的吸光度值分别为A（1.345±0.005）、B（1.247±0.014）、C(1.198±0.011)、D(1.159±0.010)、E（1.115±0.013），且呈浓度依赖性降低，差异均有统计学意义(均P0.05)，其中E孔吸光度值最低,差异均有统计学意义(均P0.05)；AVP+VD3组各孔吸光度值较对照组(1.100±0.015)均明显升高,差异均有统计学意义(均P0.05)，但较AVP组(0.776±0.013）均明显降低，差异均有统计学意义(均P0.05);3．VD3 组各孔细胞的吸光度值分别为A（0.956±0.005）、B（1.006±0.012）、C（1.052±0.004）、D（1.058±0.011）、E（1.037±0.013）, 均较对照组明显降低，差异均有统计学意义(均P0.05)；4．AVP组细胞的S期细胞百分比（35.2%）、AVP+VD3组（E孔）的S期细胞百分比（29.69%）均较空白对照组（22.57%）明显增高，差异均有统计学意义（均P0.05）；AVP+VD3组（E孔）S期细胞百分比较AVP组（29.69%VS35.2%）明显降低，差异有统计学意义（P0.05）；且VD3组（E孔）S期细胞百分比明显低于空白对照组（19.25%VS22.57%），差异有统计学意义（P0.05）;5．AVP组细胞TGF-β1mRNA表达水平较空白对照组（2.893±0.205VS1.000±0.014）明显增高，差异有统计学意义（P0.05）；VD3+AVP组（E孔）细胞TGF- β1mRNA水平较AVP组（1.895±0.122VS2.893±0.205）明显降低，差异有统计学意义（P0.05）；VD3 组细胞TGF-β1 mRNA表达水平显著低于其他各组，差异有统计学意义(P0.05);6．AVP组（78.310±4.803）pg/mg、AVP+VD3组（62.479±5.846）pg/mg细胞培养上清液中的TGF-β1浓度均较空白对照组（44.29577±7.863）pg/mg明显增高，差异有统计学意义（P0.05）；AVP+VD3组（E孔）细胞培养上清液中的TGF- β1浓度较AVP组（62.479±5.846VS78.310±4.803）pg/mg明显降低，差异有统计学意义（P0.05）；而且VD3组（20.578±3.619）pg/mg（E孔）TGF-β1 表达量显著低于其他各组，差异均有统计学意义(P0.05)。结论：1.血管加压素具有促进大鼠心脏成纤维细胞增殖的作用2.1,25-二羟维生素D3能有效抑制血管加压素诱导的大鼠心肌成纤维细3胞