20062007年广西狂犬病病毒的检测及n g基因的测序分析 word格式.docx

2006—2007年广西狂犬病病毒的检测及N、G基因的测序分析摘要目的：近年来，广西已经成为我国狂犬病发病数最高的省份，而犬是 狂犬病病毒最主要的带毒宿主。调查广西犬中狂犬病病毒的带毒情况，分 析其遗传进化特点，为制定合理的疫苗有效控制狂犬病疫情提供科学依据。 方法：本研究对2006．2007年采自广西12．个市的485份犬脑材料、387 份唾液材料，进行R-T-PCR检测和小鼠脑内接种分离，并对病毒的核蛋白和 糖蛋白基因进行测序，序列用生物软件DNASTAR进行核苷酸和氨基酸同源性比较和遗传进化树分析。 结果：一共分离到11株狂犬病病毒，其中脑组织11株，其中有一株从脑组织和唾液均分离到狂犬病病毒。通过生物软件分析，11株狂犬病毒株可以分为两个群．其中I群毒株包括GXNND(T)、GXHXB．、GⅪA11、、GXQZD，II群毒株包括GXLC9、 GⅫL、GXLCC、 GXYZD、GXLAll、GXNN2、GXPXD。11株病毒N基因核苷酸同源性89．O％一99．9％，氨基酸 同源性97．8％．99．8％。I群的N蛋白主要氨基酸位点变异在90、110、332、 397位，而II群则主要在42位和332位，且两个群在这些位点的变异与同 群参考毒株完全一致，具有群的特异性。11株G基因核苷酸同源性在 86．9％．99．9％，氨基酸同源性在93．9％一99．8％。G蛋白的氨基酸的变异主要 发生在信号肽与成熟肽，其信号肽与成熟肽的变异也具有群的差异性，I群主要的变异位点在第．6、．7、96、132、156、436、443、447位；II群主 要的变异位点在第一4、．5、．15、．18、90、156、168、204、249、253、289、 332、382、427、443、463、474、486、487位。这11株的N P主要抗原位 点没有发生变异，I群磷酸化位点Ser389也没有变化，且Th细胞表位的氨 基酸十分保守。这11株的G P蛋白只有37位和319位两个糖基化位点。 抗原位点G I、G II、GIII仅有II群毒株的GIII的332位缬氨酸变异为异亮 氨酸。从地域分布看，本研究分离的毒株大多来自南宁和柳州，II群主要 分布在的桂西一带，I群主要在桂东地区。关键词：狂犬病病毒核蛋白基因糖蛋白基因序列分析DETECTION OF THE RABIES VIRUS IN GUANGⅪFROM 2006 t0 2007 AND THE SEQUENCE ANALYSIS OF N AND G GENE OF THE ISOI—气TESAB STRACTObject： Recently，the rabies of Guangxi ProVince is highest in China， and the dog is the rabies—carrying host primarily．In thid study，The research of the prevalence and the extent of genetic diVersity of rabies in Guangxi should be useful for preVention and control of the rabies．Method： 485 samples of brain and 3 87 samples of sal iVa were collected from 1 2 cities of Guangxi and detected by reVerse transcription—polymerase chain reaction(RT—PCR)，then the positiVe samples were inoculated to mice cerebrally．Cloned and sequenced of Nucleoprotein(N)and Glycoprotein(G) genes，and the sequences were analyzed by DNASTAR．Result：There are 11 positiVe samples isolated from brain，1 salnple is isolated ftom one positiVe dog’saliVa．The phylogennetic tree show the 1 1 isolates belong to I，II groups．GXNND(T)，GXHXB，GXLAll and GXQZD belong Io group I，and the GXLC9，GXPL，GXLCC，GXYZD，GXLAl 1，IllG)a叮N2， GXPXD belon