ages对人肾小球系膜细胞pedf vegf表达的影响 word格式.docxVIP

目录中文摘要3英文摘要5英文缩略词表7前言8第一部分AGE-BSA对HRMC增殖的影响10材料与方法10结果14讨论16第二部分AGE-BSA对HRMCPEDF、VEGF表达影响17材料与方法18结果24讨论31第三部分AGE-BSA 介导HRMC PEDF、VEGF 表达的可能机制35材料与方法35结果36讨论42结论45参考文献46致谢49综述512AGEs对人肾小球系膜细胞PEDF、VEGF表达的影响研究生：盛霞导师：黄国良教授中文摘要目的：探讨体外培养条件下糖基化终产物（AGEs）对人肾小球系膜细胞（HRMC）色素上皮衍生因子（PEDF）与血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响及其可能的作用机制，进一步阐明糖尿病肾病发病机制。方法：采用不同浓度AGE-BSA作用HRMC或同一浓度诱导不同时间，噻唑蓝比色试验（MTT法）检测MC增殖活力，半定量逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)法检测VEGF、PEDFmRNA水平。免疫印记(Western-bloting)检测VEGF、PEDF蛋白及磷酸化p38MAPK蛋白表达。结果：(1)不同浓度AGE-BSA干预系膜细胞24h和200mg/L浓度的AGE-BSA 干预系膜细胞不同时间后，在一定浓度和时间范围表现明显的促系膜细胞增殖作用，各组与空白对照组、同浓度的BSA组或同时间点的BSA组比较差异均有统计学意义(P0.05)。而同等浓度和时间的BSA对均无此作用，与对照组相比差异均无统计学意义(P0.05)。(2)AGE-BSA在一定浓度和时间范围上调HRMCVEGFmRNA及蛋白，下调PEDFmRNA及蛋白表达，各组较对照组相比具有统计学差异(P0.05)。（3）p38MAPK 抑制剂SB203580（1-10umol/L）呈一定浓度依赖性逆转AGE-BSA（200mg/L）上调VEGF及下调PEDF的作用，改善PEDF/VEGF比值。（4)抗RAGE 抗体封闭胞膜，呈一定浓度依赖性（1-5mg/L）阻断AGE-BSA 上调VEGF(P0.05)及下调PEDF 表达的作用(P0.05)，从而部分恢复PEDF/VEGF 平衡，改善PEDF/VEGF 比值，且抗RAGE 抗体可阻断AGE-BSA介导p38MAPK高活化状态(P0.05)。结论：（1）AGEs在一定浓度和时间范围促HRMC增殖，上调HRMCVEGFmRNA 及蛋白，下调PEDFmRNA及蛋白表达。（2）AGEs可能部分通过RAGE-p38MAPK途径引起肾小球系膜细胞VEGF表达上调，及PEDF表达3下调，参与DN发病。关键词：糖尿病肾病，色素上皮衍生因子，血管内皮生长因子，晚期糖基化终产物晚期糖基化终产物受体，系膜细胞4Effectsofadvancedglycationend productsonthe expressionofPEDFand VEGF incultured human renalmesangial cellsMastercandidate：ShengXiaSupervisor：Prof．Huang guo--liang ABSTRACT[OBJECTIVE]Toobserve expressionofpigmentepithelium-derivedfactor(PEDF) andvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)invitrohumanglomerularmesangial cells(HRMC)inducedbyadvancedglycationendproducts(AGEs)anditspossible mechanism, to further elucidate diabeticnephropathypathogenesis.[METHOD]VitroHumanRenalMesangialCellstreated bymediumcontaining differentdoesesofAGE-BSAfordifferenttimes,MTTmethodwasusedtodetect cellsproliferation;Semi-quantitativereversetranscription-polymerasechainreaction (RT-PCR)wereusedtodetectVEGFandPEDFmRNAexpression;WesternblotingwereusedtodetectVEGF、PEDF、and P-p38MAPK proteinexpression.[RESULTS]①DiffererntconcentrationsofAGE-BSAmediateHRMC24hor AGE-BSA (200m